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百欧泰
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文献和实验REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
经验分享|动物活体光学成像实验——荧光成像(一)【自发荧光】
动物活体荧光成像实验中,一般利用荧光蛋白选择性地标记目标细胞,或用荧光染料标记药物,再通过活体成像系统进行详细观察。但是在荧光成像过程中,当观察目标的荧光信号微弱时,自身荧光会干扰目标荧光的识别。自发荧光是指由细胞结构或代谢产物等产生的自然荧光。从小分子(糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸、离子和水等)和大分子(蛋白质、磷脂、RNA、DNA 和多糖等)到更大的结构(如细胞器和细胞膜),覆盖了大部分可见光谱范围(400-700 nm)。自发荧光与标记物发射波长重叠的时候,经激发光照射会发射出与标记物相
)上检测荧光。将芯片置于显微镜的载物台上,在普通光源照明下,调节载物台的垂直位置,使待探测的芯片上表面位于20X物镜的焦平面上。再调节载物台的水平位置,使反应池位于目镜视野的中心。激发光源为氩离子激光器的488nm线,检测方式是背反式。 1.4 PCR基因芯片上应用SYBR Green荧光染料 1.4.1 普通PCR反应检测20例正常人HLA-A2与非A2,应用4步位点特异性PCR反应初筛正常人HLAA2与非A2,4步反应引物如下(表1);PCR反应条件按照本室常规。 1.4.2 用SYBR
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