甜菜坏死黄脉病毒探针法 qRT-PCR 试剂盒（不含内参）

甜菜坏死黄脉病毒探针法 qRT-PCR 试剂盒（不含内参） 

Beet Necrotic Yellow Vein Virus Probe qRT-PCR Kit

 

产品及特点 甜菜坏死黄脉病毒(Beet Necrotic Yellow Vein Virus，BNYVV) 属于马铃薯黄斑病毒科，为单链正义 RNA 病毒，基因组长度约为 8800 nt。甜菜坏死黄脉病毒的传染性较高，可以通过接触传播，如农具、叶片伤口等，以及通过种子传播，某些昆虫媒介也可能参与病毒的传播。甜菜坏死黄脉病毒感染植物后，会导致植株出现多种症状，包括叶片黄化、脉间褪绿、坏死斑点或条纹，某些情况下，病毒感染还可能导致植株生长迟缓、产量下降甚至整株死亡。甜菜坏死黄脉病毒对农作物的危害很大，会导致产量大幅下降，质量受损，从而给农民和农业生产带来巨大的经济损失，因此快速检测甜菜坏死黄脉病毒

具有重要的意义。为此，本公司以探针法 qRT-PCR 技术为基础开发了甜菜坏死黄脉病毒的检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到 100 拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据甜菜坏死黄脉病毒 RNA 高度保守区设计，不会跟其他生物的 RNA 发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。

6. 本产品足够 50 次 20 μL 体系的探针法 qRT-PCR 反应。

7. 本产品只能用于科研。

 

规格及成分

探针法 qRT-PCR 缓冲液  500 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液 v2   50 μL

荧光 PCR 专用模板稀释液   1 mL

甜菜坏死黄脉病毒

qRT-PCR 引物-探针干粉    50 次

甜菜坏死黄脉病毒 qRT-PCR

阳性对照(1E7 拷贝/μL)    50 μL

使用手册         1 份

 

注意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入 165 μL 的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

 

自备试剂 样品 RNA，超纯水，核酸纯化试剂盒。

使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 1E1-1E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。如果需要 RNA 阳性样品，需要另外订购。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6、5、4、3、2、1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 6 号管中加入 5 μL 1E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备 

7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10 μL 上步所得第 4 号稀释液再加上一

定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、Probe qRT-PCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行） 

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 RT-PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 RT-PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标

准曲线。如果做定性分析并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 RT-PCR 管，其中 N+2个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 RT-PCR 阴性对照（用水做模板），1 个

用于 RT-PCR 阳性对照（直接用第 6 步第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

 

四、数据处理 

12. 如果样本制备阳性对照或 RT-PCR 阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行 RT-PCR 扩增或跟厂家联

系。如果样本制备阴性对照或 RT-PCR 阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。

13. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。

14. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log

值，再推算出其浓度。

15. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须没有读数，或者大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小

于 40。对待测样品，如果其 Ct 没有读数、大于或等于 40 则均为阴性，如果小于40 则为阳性。