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柏莱源(天津)生物科技有限公司
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Dispase (1 U/mL)
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使用 Dispase (1 U/mL) 可温和解离多种组织。该蛋白水解解离试剂经优化,适用于人胚胎干细胞(ES)和人诱导多能干细胞(iPS)的酶法传代。将组织碎块与预热的 dispase 共孵育并轻柔振荡,即可在最小化细胞损伤的前提下释放细胞。预热的 dispase 也可用于从组织培养塑料器皿上收获细胞。
本产品含有 1 U/mL 的 Dispase II(来自多粘芽孢杆菌的中性蛋白酶),溶解于 DMEM/F-12 中。与胰蛋白酶不同,Dispase 不受血清抑制。其活性可被 EDTA 和 EGTA 抑制。应通过离心细胞悬液,随后用缓冲液或培养基洗涤细胞,以去除 Dispase。
| 亚型 | 酶解型 |
| 别名 | 中性蛋白酶 |
| 细胞类型 | 其他, 乳腺细胞, 前列腺细胞, 多能干细胞, 肠细胞 |
| 物种 | 人, 其他, 大鼠, 小鼠, 非人灵长类动物 |
| 应用领域 | 细胞培养 |
| 相关研究方向 | 上皮细胞生物学, 干细胞生物学 |
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文献和实验[1]Li H, Zhou H, Fu X, Xiao R. Directed differentiation of human embryonic stem cells into keratinocyte progenitors in vitro: an attempt with promise of clinical use. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2016 Sep;52(8):885-93. doi: 10.1007/s11626-016-0024-2. Epub 2016 Aug 5. PMID: 27496193.
[2]Song W, Kaufman DS, Shen W. Efficient generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells and characterization of their functional properties. J Biomed Mater Res A. 2016 Mar;104(3):678-687. doi: 10.1002/jbm.a.35607. Epub 2015 Nov 14. PMID: 26519950.
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人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
细胞。小心不要吸入任何气泡。 5. 将解离的细胞收集在 15 mL 锥形管中。将 1 mL 的单细胞传代培养基添加到孔中,并将收集的所有剩余细胞转移到含有细胞悬液的 15 mL 锥形管中。140 x g 离心试管5分钟并吸出上清液。 6. 将细胞沉淀重悬于 1 mL 单细胞传代培养基中。使用自动细胞计数器或Trypan blue (T8154) 和血细胞计数器计算活细胞总数。 7. 将每孔 1x106个细胞加入ECM Gel (CC131) 涂布后的6孔板中。使用单细胞传代培养基(来自步骤 1 )。总体
),1%Ⅱ型胶原酶(用DMEM配制,用时稀释成0.1%的浓度),1%胶原酶/分散酶(用DMEM配制,用时稀释成0.1%),15%葡聚糖(用PBS配制),20%BSA(用DMEM配制,调pH值至7.4后用0.45 um滤膜过滤除菌,较难过滤!),DNase Ⅰ(用冷PBS配制成2 U/ul),以上试剂经0.22 m滤膜过滤除菌后分装保存于-20 ℃;50%Percoll(配12 ml,需6 ml Percoll原液, 0.67 ml 10×PBS, 0.4 ml FBS,4.93 ml PBS
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
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