1-溴-2-(叔丁氧基甲基)苯;137395-70-1;95

NBS溴代甲基反应中的问题

9、这个反应做好了，收率不超过70 提高收率，把NBS换成溴，在四氢呋喃中反应，温度不超过15度，溴的当量在1.2左右，主要杂质为上两个的和没反应完的原料。用甲苯或者EA/PE来结晶就好了。我当时做的时候，底物略有不同，溶剂为4-甲基四氢呋喃，反应完成后，产物直接析出，过滤即可，然后用甲苯结晶纯化。

甲基化PCR检测方法

2.  连接产物的转化 （1）-70度冰箱内取出感受态细菌，融化后置于冰上； （2）连接产物15ul 全部加入，至于冰上30分钟； （3）42度， 90秒钟； （4）冰上2分钟； （5）800 ul LB培养基； （6）280 rpm，37度，摇床45分钟（将管放水平了摇，保证菌液摇匀）； （7）8 000 rpm，1分钟；在超净台内去上清，留100~150 ul； （8）涂板：37度孵箱过夜；（板为含有氨苄青霉素的固体LB培养

甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

，一般的热启动酶是可以的。我开始使用的是Takara的LA Taq，很好用，配有10x含mg++的LA缓冲液。有时候用没了，暂时以Takara 的普通Taq酶也可以。如何选择，可以根据自己的情况。初作者还是用好一点的酶。 3：PCR的条件：变性一般都选择95度，3min。其余我感觉还是根据文献，退火可以根据你的引物的退火温度在小范围内尝试。一般和文献报道差别不大。只是扩增片断特异性的问题。建议根据文献。 4：做PCR的EP管最好选择进口的，壁薄且厚度均匀，这可以保证温度的迅速变化可以及时传递给管内