ZK-90055 (hydrochloride);84638

[转贴]包涵体纯化复性

冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 5.化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好，我用的浓度一般为1mg/ml。 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入

【资源】蛋白纯化经验指南（）

%的乙醇洗5个柱床体积，流速为1ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存 缓冲液组成： 缓冲液1：20 mM磷酸盐缓冲液，pH7.4，即pH7.4的PBS溶液。配制：0.2 M NaH2PO4 19ml，0.2 M Na2HPO4 81ml加水至1000ml。 缓冲液2：50mM Tris-盐酸缓冲液，pH8.0，配制：0.1M Tris 50ml，0.1 M 盐酸29.2ml，307mg还原型谷胱甘肽，加水至1000ml。 29) 请问con A sepharose 4B 亲和凝胶

蛋白纯化经验指南

。配制：0.2 M NaH2PO4 19ml，0.2 M Na2HPO4 81ml加水至1000ml。 缓冲液2：50mM Tris-盐酸缓冲液，pH8.0，配制：0.1M Tris 50ml，0.1 M 盐酸29.2ml，307mg还原型谷胱甘肽，加水至1000ml。 29）请问con A sepharose 4B 亲和凝胶使用前的处理方法？ 不需要特别处理，直接平衡后就可以上样了。30）谢谢，我想问一下，是不是离子交换必须要线形梯度洗脱比较好呢？还是阶段洗脱好？检测器我想先收集然后再去测