γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测试剂盒(可见分光光

非放射性荧光TRA P 法对端粒酶活性的检测与定量

一、细胞裂解的准备 (1)1×107 细胞重悬, 其来源可为新鲜样品或贮存于- 80℃ 1mo l 冰冻清洗缓冲液中 的无DM SO 的样品, 冰冻缓冲液包括10mM HEPES (pH7. 5), 1. 5mM M gCl2, 10mM KCl, 1mM 二硫苏糖醇(DTT ) , 然后离心(16 000rpm、4℃、1m in)。 (2)重悬细胞团于100ul 冰冻裂解缓冲液, 其包含10mM T ris-HCl (pH7. 5) , 1mM MgCl2, 1mM EGTA

组蛋白修饰的类型

在检测试剂盒的设计上。典型 HMT 检测试剂盒用 3H-SAM 作甲基供体，并将 S-腺苷高半胱氨 酸 (SAH) 测定为甲基化反应的一般副产物。但是，这需要  处理放射性物质  较高的灵敏度，以克服甲基供体 SAM 的低 kcat（转化数通常 预先纯化酶/蛋白复合物，以评估特定 HMTs 的活性  比色或荧光检测简便，无放射性 与核提取物或纯化蛋白的相容性（检测试剂盒对目标修饰具有特异性）  3 小时内即可提供数据  表征去甲基酶活性  组蛋白去甲基化酶活性检测试剂盒通常测定

蛋白质翻译后修饰（PTMs)概述

蛋白质组是动态的，随着大量刺激的变化而变化，翻译后修饰常用于调节细胞活性。PTM 发生在不同的氨基酸侧链或肽键上，它们通常由酶活性介导。事实上，据估计，5% 的蛋白质组包含 200 多种类型翻译后修饰的酶。这些酶包括激酶、磷酸酶、转移酶和连接酶，它们在氨基酸侧链上添加或移除功能组、蛋白质、脂质或糖；以及蛋白酶，它们切割肽键以移除特定序列或调节亚基。许多蛋白质也可以利用自催化结构域，如自激酶和自蛋白分解结构域进行自我修饰。翻译后修饰可以发生在蛋白质生命周期的任何阶段。例如，许多蛋白质在翻译完成后不久就被修饰