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- 文献和实验
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- 保存条件:
-80℃(运输条件:冰袋低温运输)
- 英文名:
1-Methyl 2-Aminoterephthalate
- 库存:
99
- 供应商:
上海源叶生物科技有限公司
- CAS号:
60728-41-8
- 规格:
1ml
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文献和实验关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结
SDS-PAGE从胶中纯化蛋白质浸提液母液:0.5 mol/L Tris-CI pH 7.91.0 mmol/L EDTA1.5 mol/L NaCL1.0 % SDS上述各取1ml 混匀,加入6 ml 水,混匀,即为10ml 浸提液。回收蛋白方法:1. 使用厚胶,设两个样品孔,一个为蛋白marker,另一为样品。2. 电泳结束后,将Marker和少许样品带切下,进行染色和脱色。剩余样品胶置于4 ℃。3. 根据Marker和被染色的样品带,切下未被染色的胶中蛋白带。4. 称重,研碎,加入3~
剂如Triton X-100、脱氧胆酸盐和低浓度的变性剂如尿素充分洗涤去除杂质,这一步很重要,因为大肠杆菌外膜蛋白Omp T(37 KDa)在4-8mol/L尿素中具有蛋白水解酶活性,在包涵体的溶解和复性过程中可导致重组蛋白质的降解。 对于尿素和盐酸胍的选择: 尿素和盐酸胍属中强度变性剂,易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用,所需浓度尿素8-10M,盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱,溶解度为70-90%,尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐,对重组蛋白质的氨基
胶? 亲和的填料合成过20来种,你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗,我看FMN可偶联的有限,倒是FAD有活泼的氨基好偶联,何况它们几乎是同一个辅酶,你是不是考虑把FAD连上去.当然FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上,而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好,因此我觉得这个没有什么问题. 此外如果是以FMN为辅酶的,那我还可以建议 你试试蓝色琼脂糖凝胶,因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似,它能纯化不少脱氢酶和激酶.如果它可以你就不需要合成填料了,有现成的. 我已经给你发
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