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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-80℃(运输条件:冰袋低温运输)
- 英文名:
2-Bromo-4'-hydroxyacetophenone
- 库存:
99
- 供应商:
上海源叶生物科技有限公司
- CAS号:
2491-38-5
- 规格:
1ml
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文献和实验STANDARD PLANT MOLECULAR BIOLOGY PROTOCOLS
411400 (Boehringer). For 10mM stock, weigh out 1mg (light sensitive!), add 27ul DMSO to solubilize, then add 12ul 3M NaOAc, pH5, mix, then 275ul H2O, Don''t make up large amountrs as this is not very stable, even at -80C. Diluted luciferin solution
苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次;另外,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取。 这是标准配方: 裂解液:50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 但我个人的经验是:如果你裂解细菌是为了提取蛋白的话,而且蛋白的分子量又小于20kd的话,尽量减少溶菌
,使用的还原剂为0.1-5mM。EDTA为0.1-0.3 mM。去垢剂如Triton X-100、脱氧胆酸盐和低浓度的变性剂如尿素充分洗涤去除杂质,这一步很重要,因为大肠杆菌外膜蛋白Omp T(37 KDa)在4-8mol/L尿素中具有蛋白水解酶活性,在包涵体的溶解和复性过程中可导致重组蛋白质的降解。 对于尿素和盐酸胍的选择: 尿素和盐酸胍属中强度变性剂,易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用,所需浓度尿素8-10M,盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱,溶解度为70
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