HIST1H4G基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液

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】1. 消化缓冲液：100 mM NaCl，10 mM Tris.Cl (pH8.0)　25 mM EDTA (pH8.0)，0.5% (w/v) SDS，0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存；2. 将 200 mg～1 g 的组织用预冷的研钵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮，然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h

Real-time PCR实验攻略

所用Trizol体积的10%；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10×106个细胞加1 ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；   2.  将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30 ℃下放置5分钟；然后以每1 mlTrizol液加入0.2 ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。 在室温下（15 ℃～30 ℃）放置2～3分钟后，12000 g（2 ℃～8 ℃）离心15分钟；   3.  取上层

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），加入1mL红细胞裂解液，轻轻振荡（切勿吹打）；室温孵育5分钟后加入10mLAdvDF+++培养基，4℃、250×g离心5分钟，弃上清。 10.基底膜提取物（BME）重悬细胞并接种： a.轻柔吹打重悬沉淀，避免产生气泡。 b.按沉淀体积的70%-75%加入BME。 c.用200μL移液器轻柔重悬，向预热的多孔培养板中滴加20μL液滴：24孔板每孔3滴，12孔板每孔6滴，6孔板每孔10滴。 关键注意：BME需提前4℃解冻12-16小时，操作全程置于4℃以保持液态 关键注意：多孔培养板需提前37℃预热