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- 文献和实验
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RT
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99
- 供应商:
上海源叶生物科技有限公司
- 规格:
500ml
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文献和实验稀释液为pH4.5。 2、室温下边搅拌(磁力搅拌器或电功搅拌器),边缓慢滴加辛酸(25ml/L血清稀释液),滴加完后继续搅拌30min。 3、离心(10000r/min,30min),收集上清夜,弃去沉淀。 4、上清液用多层纱布过滤。 5、按1/10体积加入10×PBS,用5mol/L NaOH调至PH7.4。 6、上清液4℃预冷,计算溶液总体积,在4℃按277g/L加入硫酸铵粉沫(45%饱和度),边加边搅拌,加完后继续搅拌30min。 7、离心(5000r/min,15min)),弃去上清
。 浓缩胶缓冲液:Tris-Base 30.25 g,20% SDS 10 ml,加三蒸水60 ml,饱和盐酸调pH 至6.8,定容至500 ml,4℃备用。 分离胶缓冲液:Tris-Base 90.5 g,20% SDS 10 ml,加三蒸水约60 ml,饱和盐酸调pH至8.8,定容至500 ml,4℃备用。 10×电泳缓冲液:29gTris-Base,144g Glycine,10 g SDS加500 ml三蒸水溶解,震荡混匀后,定容至1000 ml,4?C 备用,用时稀释至1倍
值7.5,500mmol/L NaCl,100mmol/L咪唑)洗脱,每管收集1ml组分,共4~10ml。 8) 将抗体组分对PBS透析以去除咪唑和高浓度氯化钠。 9) 用复原缓冲液(50mmol/L磷酸盐缓冲液pH值7.5,500mmol/L NaCl,250mmol/L咪唑)清洗柱子后,用上样缓冲液(50mmol/L磷酸盐缓冲液pH值7.5,500mmol/L NaCl,20mmol/L咪唑)平衡柱子。 4. Fab抗体的特异性鉴定 对于所获
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