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99
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上海源叶生物科技有限公司
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100ml
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文献和实验)180mL,2%明胶50mL,加蒸馏水至几,调节至pH7.5;(4)0.1mol/L乙二胺四乙酸三钠原液(EDTA-Na3) EDTA-Na3 37.23g,NaOH 4.00g。分别将EDTA-Na3溶于500mL蒸馏水中,NaOH溶于100mL蒸馏水中,将NaOH溶液加入EDTA-Na3溶液中混合,用1mol/LNaOH调节至pH7.5,加蒸馏水至1L;(5)0.01mol/LEGTA-GVB2应用缓冲液 巴比妥缓冲液原液(5X)360mL,0.1mol/LEDTA-Na3原液200ral,2%
.5 g 氟化钠。贮存在室温,最多保存一个月。 ( 6 ) 0.2 mol/L pH 7.8 的磷酸盐缓冲液贮存液:在 50 ml 的水中溶解 1.4 g KH2PO4。在 500 ml 的水中溶解 17.4 g K2HPO4。混合两种贮存液,配制成 550 ml 的 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液,pH 7.8。贮存在 -20°C,可放置数月。 2. 缓冲液 ( 1 ) 悬浮细胞的洗涤缓冲液(WBSC ):20 mmol/L 氯化钾,5 mmol/L EDTA。这个缓冲液是从
步骤如下: 试剂与细胞准备:推荐使用Annexin V/7-AAD进行凋亡染色,并采用EGFP稳定转染的K562细胞作为靶细胞以提升灵敏度。 样本处理:提取新鲜抗凝全血中的PBMCs,经密度梯度离心分离、洗涤后,用含血清培养液重悬至5×10⁶/mL;同时将靶细胞调整至5×10⁵/mL,确保活力大于95%。 共培养体系:按效靶比10:1混合效应细胞与靶细胞(各100μL),设培养基对照孔,于37℃、5% CO₂条件下共培养4小时。 检测与分析:收集细胞进行Annexin V/7-AAD染色。流式分析时先圈选
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