代森铵;3566-10-7;100mg/L于甲醇;B2888

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

有黑点。 方法4 免疫印迹 1样品制备和蛋白定量 1.1 容液配制 10ml100mmol/L PMSF:0.1742g溶于10ml的异丙醇中,至与4?C保存。 50ml 5mol/L NaCl:14.61g溶于40ml三蒸水中，定容至50ml。 100ml 20% SDS:20g溶于80ml水中，加热溶解，定容至100ml。 100ml 1mol/LTris-HCl: 12.114g溶于80ml三蒸水中，定容至100ml。 配RIPA裂解

种子蛋白质系统分析：（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）

ml，溴酚蓝0.5g，SDS l0g，溶于水，用HCI调PH至8.0，定容至500ml。( 11)脱色液 甲醇：乙酸：水＝5：1 ：5（体积比）( 12)染色液（0.25%考马斯亮蓝R250）1.00g考马斯亮蓝R250，用脱色液400ml溶解，过滤备用。( 13)低分子质量标准蛋白溶液，包括溶菌酶（MW=14400Da）大豆胰蛋白酶抑制剂（215000）、碳酸酐酶（310000）、卵白蛋白（450000）、牛血清白蛋白 (662000）、磷酸化酶B (925000）。用样品缓冲液配成2mg/ml

Western 实验步骤

液裂解细胞，用移液器适当吹打使细胞脱落，大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解，裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理：先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基，每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min，取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周，-20℃ 可保存约 2 个月，-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定：酶标板，酶标仪、离心机、1 mg/mL