CelRed 核酸染料;10000× 水溶液;S22152-

微量RNA的抽提RNeasy MinElute Spin Column（QIAGEN）

。 10.将柱子转到1个新的2ml 收集管中，加500 ul Buffer RPE 到柱子中，轻轻盖上 试管 8000×g（or 10000rpm）离心15s洗柱子，弃掉收集管中的液体，收集管再用。 11.加500 ul 80％乙醇 到柱子中，轻轻盖上管盖，8000×g（or 10000rpm）离心2 min 以使硅胶薄膜干燥，弃掉收集管及收集管中的液体。（柱子不要碰到收集管中的液体） 12.将柱子转入1个新的2ml 管中，打开

手把手教你做好体外 DNA 重组

；3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700×g，离心 10 min。如果样品溶解得不好，再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液，重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质，重复抽提一次，将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中；4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇，12 000 rpm 离心 2 min；5. 用 70% 乙醇洗涤，晾干，沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋

微管蛋白的可溶性表达及纯化

变性；而时间太短则破碎不彻底，蛋白无法释放出来；注意：第7步可选作，若经过冻融及溶菌酶处理后的菌悬液比较澄清，则可不用超声破碎。8、4℃，10000rpm20~30min，取上清；将沉淀用变性的BindingBuffer（8M尿素）悬浮，然后室温摇动30min，取40ul进行电泳样制备S2；9、4℃，10000rpm10min，对上清再离心一次，取40ul进行电泳样制备S3；10、上清通过0.45um的细菌过滤器，取40ul进行电泳样制备S4；11、用HisTrap纯化：a）洗柱：用5倍柱床体积（5ml