胰酶细胞消化液（0.25%胰酶，含EDTA，不含酚红）;R3

胰酶使用注意及贴壁细胞的消化

细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4、此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。常用的细胞消化液为胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞

染色体 G 显带核型分析

。其所显示的染色体带纹清晰，普通显微镜下可以分辨，标本可长期保存，因此被广泛应用。实验步骤（以下以贴壁培养细胞为例）一、实验准备1）细胞完全培养基：根据细胞类型和实际需要确定2）细胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA3）磷酸缓冲液（PBS）：pH7.44）秋水仙素（或者秋水仙胺）溶液：20 μg/mL5）低渗液：0.075 M KCl 溶液6）固定液（新鲜配制）：甲醇：冰醋酸 = 3：17）Giemsa 染色液：先配置 1% Giemsa 原液（以甘油，甲醇配制），再以 PBS 稀释 10 倍

做了 5 年 MTT 实验，跟你分享几点心得体会

。4. 比色：选择 490 nm 波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。个人心得体会1. 细胞消化、接种数量：注意消化和数量，消化和数量，消化和数量（重要的事情说三遍）。从我个人的实验经验来看，这是重中之重。若消化出现问题，则会影响细胞的活性，进而影响 OD 值。对于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的细胞，消化时胰蛋白酶中不添加 EDTA，消化时也仅需胰酶浸润数秒即可。然而，对于 SW480 等一系列难以消化的细胞，胰蛋白酶中需添加浓度为 0.25%