胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚红;R33084

EDTA-胰蛋白酶的配制

问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没

写给细胞小白的实用手册

培养箱中。或者在消化时看到细胞有脱落的迹象即可去除消化液，加入适量的培养基轻轻吹打瓶壁，根据细胞密度按照比例接种到细胞培养瓶。经长期对比发现，此方法比离心传代对细胞的损害较小。冻存1. 选择处于对数生长期的细胞。在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用 0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液，然后将细胞收集于离心管中离心 （800 r/min，20 S）。2. 配制冷冻保存溶液 （使用前配制

正常人骨膜内成骨细胞原代培养

1. 取人手术切除之骨膜，放入盛有缓冲液的培养皿中，去除附于骨膜上的结缔组织； 2. 将骨膜剪碎成1—2mm2大小的组织块（膜片）； 3. 加入0.1%EDTA与0.25%胰蛋白酶（1：1，V/V）混合消化液，在37℃下消化20—30min。以1000r/min离心1—2min，沉淀骨膜组织块，除去上清液； 4. 用缓冲液洗沉淀骨膜组织块2—3次，重复上述离心过程； 5. 在37℃下再用1mg/mlⅠ型胶原酶消化骨膜组织块约90