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- 2025年10月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 库存：
100
- 灵敏度：
详询
- 样本：
血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种：
人
- 应用：
科研
- 检测方法：
夹心法
- 检测范围：
详见产品手册
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥900.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1300.0 |
英文名称：Anti-keratin antibody
简称：AKA
单位：ng/ml
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6个月。
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗角蛋白抗体含量。
实验原理：
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗角蛋白抗体（AKA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗角蛋白抗体（AKA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
试剂盒组成：30 倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A 液、显色剂 B 液、终止液、标准品、标准品稀释液、产品手册、封板膜、密封袋。
样品收集、处理及保存方法：
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样，待测样品孔中先加样品稀释液 ，然后再加待测样品（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂A，再加入显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。
10.终止：每孔加终止液，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
操作注意事项：
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照产品手册操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照产品手册中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
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文献和实验抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPA）检测在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）诊疗过程中的地位无可替代。 ACPA 是一大类与瓜氨酸蛋白相关的抗体，在临床常规检测中最常见的有 抗环瓜氨酸肽（Anticycliccitrullinated peptide antibodies，抗CCP）抗体 抗角蛋白抗体（Anti-keratin antibodies，AKA） 抗突变型瓜氨酸波形蛋白（anti
-KeratinAntibodies）。这是因为曾经称SC为“角蛋白层”，过去大多数学者进行AKA检测时，并没有对所出现的各种类型的荧光图形进行对比、分析、分型，而是含糊的以仅在食管上皮角质层出现线状或板层状荧光为阳性标准，实际上这一标准的含义并不确切。1989年Vincent等提出只有在角质层显示线状或板层状的强荧光，而棘细胞层同时不出现弱荧光或荧光较弱时，始能认为是对RA具有特异性的抗体。目前与AKA特异性结合的鼠食管SC抗原的性质已基本弄清。因此，抗原相应的抗体应称为抗角质层抗体或抗角蛋白抗体角质层型。 AKA主要
：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量
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