Guanoxan Hemisulfate;5714-04-5

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

我是一个门外汉，刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子，还有就是只有黑点，没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测，取300mg肌肉，最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法，按没分钟1KD转的。一抗1：1000.二抗1：6000。。 我测的蛋白在95KD左右，一半装2-2.5小时。但是结果不是背景强就是没东西。而且经常

考马斯亮兰法（bradford法）蛋白质含量测定

蛋白质溶液。 ② 考马斯亮兰g—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰g—250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。 2. 器材： ① 可见光分光光度计 ② 旋涡混合器 ③ 试管16支 三、操作方法 1. 标准方法 ① 取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08

【原创】微板考马斯亮蓝蛋白定量法 ，大家共享!评论一下各位的心得

微板考马斯亮蓝蛋白定量法 1. 0.01%考马斯亮蓝液的准备 称取10 mg考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue，CBB）G-250溶于5 ml 95%的乙醇中，加入85%的磷酸10ml，混匀，作为储存液保存于4℃。使用时取此母液每1.5 ml用双蒸水稀释至10ml即为工作液，应避光保存，一月内用完。若有不溶沉渣宜滤纸过滤后使用。 2. 制作标准曲线 表1 组织匀浆液蛋白含量测定中标准曲线的制作 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 BSA Conc