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RT
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见标签
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999
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
100MG

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文献和实验】1. 消化缓冲液:100 mM NaCl,10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0),0.5% (w/v) SDS,0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存;2. 将 200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮,然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
Supplies: Ethanol 100 USP (highest quality) FACS Staining Buffer (1XPBS w/ 3 calf serum, 0.05 azide--filtered) ―Dilute staining antibodies in Buffer DNAse (Sigma D-5025, Bovine Pancreas) RNase (Boehringer, 25 mg bovine pancrease)
、在立体显微镜下,可以看到明显的 3D 结构。使用 200μl 移液器吸头从每个孔中收集球状体,并将大约 50 个球状体集中到 5ml 微量离心管中。 中肠和后肠球状体生长成人肠类器官 11、收集球状体后,将微量离心管垂直放置在管架上 10min,此时球体通过重力沉降到离心管底部。吸出上清,控制总体积在 25μl 左右。 12、将冻存的 Matrigel 在 4℃ 下过夜解冻,添加 B-27 补充剂(终浓度 1×)、R-spondin1 (终浓度 500ng/ml),Noggin (终浓度100
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