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RT
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见标签
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999
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联硕生物
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100G

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文献和实验,Taq PCR MasterMix 扩增产物可用于 T/A 克隆。本产品加入特殊稳定剂,37 ℃ 温度下 48 h仍然保持 95% 以上的扩增效率.储存条件: -20 ℃ 一年有效,多次冻融不会影响活性,经常使用可放置于 4 ℃。 本品为适应大部分 PCR 反应需要,Taq 酶量是按照 PCR 反应酶量上限所加,如出现 PCR 反应非特异性扩增明显或者背景过高,可将 Taq PCR MasterMix 反应液适当稀释后使用,可改善 PCR 扩增效果。 PCR 反应液: 组成成分 50
性。8、引物的3′端引物的延伸是从3′端开始的,不能进行任何修饰。3′端也不能有形成任何二级结构可能,除在特殊的PCR(AS-PCR)反应中,引物3′端不能发生错配。在标准PCR反应体系中,用2U Taq DNA聚合酶和800μmol/L dNTP(四种dNTP各200μmol/L)以质粒(103拷贝)为模板,按95℃,25s;55℃,25s;72℃,1min的循环参数扩增HIV-1 gag基因区的条件下,引物3′端错配对扩增产物的影响是有一定规律的。A∶A错配使产量下降至1/20,A∶G和C∶C错七
在40%~60%之间,Tm值最好接近72℃。 GC含量(composition)过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外,上下游引物的Tm值(meltingtemperature)是寡核苷酸的解链温度,即在一定盐浓度条件下,50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度,一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm=4(G+C)+2(A+T)估计引物的Tm值,则有效引物的Tm为55~80℃,其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4. 引物3′端要避开密码子的第3位
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