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999
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鹿森生物
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5ML

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文献和实验溴化乙啶染色 1.原理 溴化乙啶(ethidium bromide,EB)是最常用的嵌入性荧光染料,活细胞或固 定细胞均能从极稀溶液中摄取EB染料,DNA螺旋暂时弯曲允许EB荧光染料嵌入大分 子疏水中心的碱基对之间。 标本经强酸(0.25mol/LHCl,pH 0.6)水解破坏RNA后,可特异 地显示DNA,而标本经0.1mol/L盐酸的无水甲醇处理(55℃,3小时),使DNA甲基化,则 可阻止DNA染色,此时EB仅与RNA结合,可特异
染料同时染色细胞,为鉴别凋亡细胞和坏死细胞提供较好的方法。 染料: 吖啶橙(AO)膜通透性较高的染料 溴化乙啶(EB) 正常细胞: AO- 绿色荧光强, EB- 染色红色荧光较弱; 凋亡细胞: AO- 绿色荧光强度弱减, EB- 染色红色荧光加强; 坏死细胞: AO- 绿色荧光强度弱或消失, EB- 染色红色荧光强 (EB可诱导AO的淬灭)。
%、且大部分无分化的状态时,吸出培养基。 3、向 hPSCs 中加入 0.5 mM EDTA 洗涤细胞一次。 4、吸去 EDTA 溶液,每孔加入 0.6ml Accutase,并将培养皿放置在 37℃ 解离约 3-5min,直到所有的细胞变圆。 5、向每个孔中加入 5ml 的 hPSCs 培养基,并用 0.1% 台盼蓝进行染色计数。 6、将所有细胞转移至 15ml 离心管中,室温下 300g 离心 3min,收集沉淀细胞。6 孔板中每孔接种 2×105 个细胞,加入预热的 3ml hPSCs 培养
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