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联硕生物
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5ML

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文献和实验聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)(图)
-为慢离子,采用三羟甲基氨基甲烷(简称Tris)作为缓冲配对离子。 电泳开始前,如图15-5A所示,慢离子位于两个电极槽中,快离子分布在三层凝胶中,样品在样品凝胶中,缓冲配对离子位于全部系统中。电泳进行中如图15-5B所示,快离子与慢离子的界面向下移动,由于选择适当的pH缓冲液,使蛋白质样品的有效迁移率(有效迁移率=mα,m为迁移率,α为解离度)介于快离子与慢离子的界面处,而浓缩成为极窄的区带。它们的有效迁移率按下列次序排列:mclαcl>mpαp>mGαG(Cl代表氯离子,P代表蛋白质,G
片段。 3.目的片段的克隆 纯化的片段连接到克隆载体pGEM-Tvector,转化导入宿主菌E.coliDH5α,通过蓝白斑筛选,PCR扩增鉴定后测序,获得的含所需要的目的片段的质粒。 (1)pGEM®-TEasy载体系统 I.描述 pGEM®-TEasy载体系统可用于PCR产物的克隆。这种载体是通过EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM®-TEasy载体,并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率,因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为
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