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RT
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见标签
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999
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联硕生物
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250MG

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文献和实验细胞系等,该细胞有一定自发转化倾向,一般在转染前一天接种细胞,接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液,37℃、5%CO2 培养,待细胞占50~70%瓶底面积时,用于转染试验。 (3)DNA-磷酸钙沉淀物的制备 ①将供体细胞DNA和PSV2-neo质粒载体DNA用TE配制成40mg/L的DNA溶液,同时向供体细胞DNA液200μl中加入带基因neo质粒DNA液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1~2mg/L的使用量)。 ②取500μl上述
In vitro transcription with yeast nuclear extract
buffer 0.63 microliters 0.1 M DTT 3 microliters phospho creatine (64 mg/ml pH 7.5) 0.1 microliter creatine phospho kinase 1 microliter NTP mix (10 mM each ATP, CTP, GTP, UTP) 150 ng plasmid DNA template(0.125 microliters 10% NP40 can be added
filter sterililize; no DEPC treatment. Preparation of dNTP's. The quick protocol for ~100mM stock. dilute all four dNTP's (250mg of each) in 3.676ml of H2 O; + 424µl 5M NaOH; check the pH: ~0.5µl on pH-paper
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