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999
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联硕生物
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500MG

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文献和实验Gene Knockout with Conventional Mutagens
Taq polymerase 5 ul 10x PCR buffer (100 mM Tris pH 8.3, 500 mM KCl, 20 mM MgCl2) 0.5 ul 10 mg/ml acetylated BSA (NEB) 1 ul 10 uM left primer 1 ul 10 uM right primer 1 ul 10 mM dNTPs (10 mM each of dATP, dCTP, dGTP, dTTP
培养基中,37℃振摇过夜。 (2)接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基,37℃振摇,至OD600 达到0.4. (3)迅速将培养物置于冰浴中30min,至充分冷却。 (4)将菌液转移至预冷的离心管中,4℃下以2500r/min离心15 min,弃培养液,回收细胞。 (5)以10ml预冷的10%甘油洗涤沉淀,低温离心,共两次。 (6)加约1ml(适量)预冷的10%甘油重悬沉淀,稀释悬液100倍,测量OD600,至稀释浓度为2-3×1010个细胞/ ml (1.0 OD600约
DOP-PCR OF DNA FOR COMPARATIVE GENOMIC HYBRIDIZATION
x Taq Buffer (Boehringer): 100mM TrisHCl; 2mM MgCl2; 500mM KCl; 1mg/ml gelatin. DOP Primer : 5'-CCG-ACT-CGA-GNN-NNN-NAT-GTG-G-3'. Use at 1.4 mM. Topo-1 : Promega. Sequenase -Vers 2 (USB/Amersham): Use at 1:8 with Sequenase
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