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RT
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见标签
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999
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鹿森生物
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1ML

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文献和实验RNA的提取准备试剂:氯仿,异丙醇,75%乙醇,无RNase的水或0.5%SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制) 操作步骤: 1. 匀浆处理: ① 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。 ② 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞
实验目的:掌握由动物组织中提取总RNA的方法 实验原理:Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同,造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则分布在上层的水相中,最后用异丙醇沉淀水相中的RNA,并用70%乙醇洗涤沉淀,这样就可以得到比较纯净的总RNA. 实验步骤: ① 先在研钵中加入液氮,再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末,用液氮预冷的药匙取50~
值。每μg DNA使用3~5单位的酶,80~90%的DNA是可消化的。 1ml 8mM NaOH溶解的DNA样品pH值调节Final pH 0.1M HEPES(μl) Final pH 1M HEPES(μl)8.4 86 7.2 238.2 93 7.0 328.0 1017.8 1177.5 159 注意事项: 1. DNA在中间层和有机相中时可在2~8℃保存过夜。 2.DNA沉淀在75%乙醇中2~8℃可保存几个月。 3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜,如长期保存需用
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