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- Sigma
- 进口
- 292893-5G
- 2025年10月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
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RT
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见标签
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999
- 供应商：
联硕生物
- 规格：
5G
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文献和实验一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g/L L-Glutamine,0.2 g/L NaCL,0.2 g/L MgSO4 ,0.3 g/L Yeast extract,PH7.0）液体培养基中，220rpm，28℃振荡培养18 hr
溶，0.5g组织，溶液E可增加至300ul，此时DNA浓度大约为100ng/ul。（二）限制性酶切及连接在0.2ml离心管中加入：模板量约为250ng，2.5μl 10×酶切缓冲液， 2.5μl 10×T4DNA连接酶切缓冲液，5U EcoRⅠ， 5U MseⅠ，2U T4连接酶，50pmol MseⅠ接头（序列见表2），双蒸水补至25μl。用PE公司PCR扩增仪设定37℃过夜反应后，于65℃20min灭酶活，－20℃保存，作为预扩增模板。（三）预扩增取3μl酶切连接产物，加入75ng E
具有特异配对顺序的内切酶片段，进行结合，导致特异性扩增。 二、实验试剂 Taq酶 EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接头 E+A引物M+C引物T4DNALigaseE和M引物琼脂 过硫酸胺丙烯酰胺尿素硝酸银甲酰胺 dNTPs 二甲苯青 冰醋酸玻璃硅烷50bpMark 三、操作步骤 1. 基因组DNA提取和纯化 DNA的纯化：用0.8%琼脂糖凝胶（含EB 0.5 μg/ml）电泳检测片段大小，取出其中的1/3已提取的基因组DNA进行纯化，首先用TE缓冲液补满
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