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- Sigma
- 进口
- 279315-1G
- 2025年10月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
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RT
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见标签
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999
- 供应商：
联硕生物
- 规格：
1G
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文献和实验取腺病毒以m.o.i=5病毒量感染293细胞，待细胞病变达+++～++++时收获。 沉淀细胞加2m1 TE重悬，分装四个1.5ml Eppendorf管， 每管加蛋白酶K(20μg/μl)7μl和10% SDS 50μl,37 C孵育1 h, 再加5mol/L NaCI 150μl置于4℃反应2ho 13,000rpm离心30min， 转移上清，用等体积酚、酚一氯仿/异戊醇、氯仿/异戊醇各抽提一次， 抽提上清加入1/10体积2.5mol/L的乙酸钠(pH5.2)和2倍
管。 8． 4°C，12000g，10min。 9． 弃上清，室温干燥蒸发残存乙醇，数分钟。 10．加100ml 水溶解RNA，测含量。 11．加1／10体积3mol乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积预冷的无水乙醇置-30℃30min。 12．离心，12000g，15min． 13．弃上清，加预冷的70％乙醇1ml，12000g，离心5min。弃上清，室温放置数分钟。 溶解RNA：每20
匀浆。2. 加2 M乙酸钠（pH 4.0）0.2ml，混合后将溶液转移至5ml离心管中。3. 加酚：氯仿：异戊醇2.2ml，颠倒混合用力振荡10s，冰上放置10min。4. 4℃离心，12000g×20min。5. 小心吸取上层含有RNA的水相，并转移至一新的5ml离心管中。避免吸取两相之间的蛋白物质。6. 加等体积的异丙醇，置-20℃至少30min，沉淀RNA。7. 4℃离心，12000g×15min。8. 弃上清，再加变性液2ml重悬RNA沉淀物，振荡直至RNA完全溶解（必要时可65℃水浴促溶
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