Gibco (货号:10639011)StemPro™-34

一、产品概述

StemPro-34 SFM是一种无血清培养基，专门用于支持人类造血祖细胞（如CD34)的体外培养。该培养基可用于研究来自骨髓、外周血或新生儿脐带血的造血细胞。StemPro-34 SFM由基础液体培养基和冻存的40倍浓度营养补充剂（StemPro-34 Nutrient Supplement）组成，使用时再添加冷冻的40倍浓缩营养液。本培养基生产过程中未添加任何细胞因子和造血生长因子，使研究人员能够自由选择研究所需的单一或组合因子。StemPro-34 SFM含有来源于人类、重组或合成的成分，并已在正常人骨髓中完成性能验证。

二、产品特点

1.无血清与化学成分明确：不含血清、牛血清白蛋白（BSA）及不明添加剂，所有成分均经过严格筛选与定量，确保实验结果的可重复性与一致性，降低外源污染物风险。
2.高效支持干细胞扩增：通过优化的营养配比（如氨基酸、维生素、重组蛋白等），促进干细胞在贴壁培养条件下快速增殖，维持细胞形态均一性，传代次数可达10代以上仍保持未分化表型。
3.维持干细胞多能性：配方中添加特异性生长因子（如FGF-2、EGF等）及小分子抑制剂，有效抑制干细胞自发分化，维持其干性标志物（如Oct4、Sox2、Nanog）的高表达。
4.无动物源成分：避免传统血清培养基中的异源蛋白、病毒或朊病毒污染，符合临床前研究及细胞治疗应用的严格标准。

三、产品性能展示

细胞因子驱动的扩散。
 
与经典培养基(IMDM+20%FBS)相比，在StemPro®-34SFM中培养的细胞因子驱动的骨髓来源的CD34+细胞扩增了3倍，CD34+细胞的数量增加了13倍，总细胞数量增加了13倍，而CD34+细胞的数量减少了3%。StemPro®-34SFM在细胞因子驱动的CD34+细胞扩增方面比经典培养基(IMDM+20%FBS)增加了3倍。CD34+骨髓细胞来自10名捐赠者，分别接种在2x10⁴细胞/mL的24孔平底培养皿中，培养6至8天。StemPro®-34SFM或经典培养基(IMDM+20%FBS)被补充生长因子SCF(100ng/mL)、IL-3(50ng/ml)和GM-CSF(25ng/mL)。总数被统计。CD34+细胞在第0天和第6至第8天通过FACS分析确定。

四、产品规格

五、使用方法

（1）准备步骤
1.复温：使用前将培养基从2–8°C取出，室温静置30–60分钟至完全复温，禁止加热或剧烈摇晃。
2.无菌检查：使用前目测培养基是否有浑浊、沉淀或污染迹象，若出现异常请勿使用。

（2）制备介质
补充剂StemPro®-34SFM基础培养基含StemPro®-34营养补充剂和L-谷氨酰胺：
1.将ThermStemPro®-34营养补充剂在4°C下过夜解冻。多次轻轻颠倒小瓶，充分混合。
2.使用前，将全部内容物（13mL）StemPro-34营养补充剂直接无菌添加至500mLStemPro-34SFM基础培养基中。旋
转混匀。注意：StemPro-34营养补充剂可解冻、分装并再次冷冻一次。避免反复冻融循环，解冻后立即使用。
3.无菌添加5mL 200mM L-谷氨酰胺（终浓度为2mM）至使用前500mL StemPro®-34SFM基础培养基。
4.补充完整StemPro-34 SFM中添加细胞因子或生长因子，以延长祖细胞的培养支持。注意：对于造血干细胞（HSC）培养，我们建议在使用前立即向完整StemPro-34SFM中添加细胞因子自洽场（100ng/mL）、IL-3（50ng/mL）和GM-CSF（25ng/mL）。

（3）细胞接种
1.细胞复苏：将冻存的hMSCs在37°C水浴中快速解冻，加入预热的完全培养基（含补充剂的StemPro™-34 SFM）离心（200×g，5分钟），弃上清后重悬细胞。
2.接种密度：以5,000–10,000 cells/cm²的密度接种于明胶包被的培养器皿中（明胶包被浓度：0.1%，37°C孵育30分钟后吸弃）。
3.培养条件：37°C、5% CO₂、湿度饱和的培养箱中培养。

（4）培养基更换
1.首次换液：接种后24–48小时更换新鲜完全培养基，以去除未贴壁细胞和残留的冻存保护剂。
2.常规换液：此后每2–3天更换一次培养基，换液前将培养基预热至37°C，操作时避免直接冲击细胞层。

（5）细胞传代
1.传代时机：当细胞融合度达到70–80%时进行传代，避免过度融合导致细胞分化。
2.消化步骤：
①.吸弃旧培养基，用PBS（不含Ca²⁺/Mg²⁺）轻柔洗涤细胞1–2次。
②.加入0.25%胰蛋白酶-EDTA（37°C预热），覆盖细胞层，37°C孵育2–5分钟至细胞变圆脱落。
③.加入等量完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞至单细胞悬液，离心（200×g，5分钟）后重悬，按1:3–1:5比例传代至新的明胶包被培养器皿中。

（6）细胞冻存
当细胞处于对数生长期（融合度60–70%）时，用胰蛋白酶消化后离心，重悬于冻存液（含10% DMSO的完全培养基）中，密度为1–5×10⁶ cells/mL，梯度降温后于-80°C过夜，次日转移至液氮中长期储存。

（7）注意事项
1.无菌操作：全程严格无菌操作，避免污染；分装或更换培养基时使用无菌吸管和离心管。
2.避免反复冻融：基础培养基和补充剂分装后，建议-20°C单次冻存，避免多次冻融影响性能。
3.细胞监测：定期通过显微镜观察细胞形态（典型成纤维样梭形），若出现形态异常或生长缓慢，需检查培养条件或细胞活力。
4.安全提示：DMSO对皮肤和黏膜有刺激性，操作时佩戴手套和护目镜；废弃培养物需按生物安全规定处理。

（8）预期结果
在正确使用条件下，hMSCs可在StemPro™-34 SFM中稳定传代8–10代，保持CD73、CD90、CD105等表面标志物阳性，CD34、CD45阴性，并维持向成骨、成脂、成软骨方向的分化潜能。

（9）故障排除
1.细胞贴壁不良：检查明胶包被是否充分，或尝试提高接种密度；确保培养基pH值（7.2–7.4）和渗透压正常。
2.细胞增殖缓慢：确认培养箱CO₂浓度和温度稳定；检查培养基是否添加补充剂，或是否超过保质期。
3.细胞分化：避免细胞过度融合（超过80%），控制传代次数（建议不超过10代），换液时避免剧烈晃动。

六、质量控制

•每批次产品均通过无菌性、内毒素（<0.1 EU/mL）、pH值、渗透压（280-340 mOsm/kg）及干细胞增殖/分化活性验证。
•符合ISO 13485质量管理体系标准，支持药物主文件（DMF）备案需求。

七、内容与储存

•500mL StemPro™-34无血清培养基（在黑暗环境中于 2°C 至 8°C 下储存）
•13mL StemPro™-34营养素补充剂（在黑暗环境中于 -5°C 至 -20°C 下储存）
完全培养基在黑暗环境中于 2°C 至 8°C 下储存。