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- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
160
- 英文名：
Corynebacterium diphtheriae Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Corynebacterium diphtheriae Detection Kit
白喉杆菌是引起白喉的病原体，由于人群白喉杆菌带菌率很低,采集样本量很大 时,常规检验方法繁琐且检出率低, 所以白喉的早期诊断与治疗对预后至关重要。目前, 白喉杆菌的临床诊断主要依靠血清学检测,但是由于特异性抗体出现较晚,故无法在早期对该病进行诊断。细菌培养分离方法操作复杂和耗时，而且成功率不高。普通 PCR 法显得不敏感，加上 PCR 法的其它缺陷,使得白喉杆菌的 PCR 检测难以在临床上推广使用。实时荧光定量 PCR 是一种快速检测病原体的高特异和高敏感技术。 本试剂盒利用实时荧光定量 PCR 原理，定性检测白喉杆菌，对白喉杆菌的诊断及疗效评估有重要指导意义。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，针对白喉杆菌TOX B 基因高度保守区设计一对特异性引物和探针，利用相应仪器对 PCR 过程进行实时监测，实现检测结果的定性分析，用于对可疑感染者的病原学检测。
白喉杆菌(CD)核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 名 称 | 规 格 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| CD 反应液 | 500μL×2 管 |
| CD 阳性质控品 | 50μL×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：适用于人体的血液、体液和棉拭子等多种样本。
保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 血液、体液和棉拭子样本取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中 1.2 DNA 提取 1) DNA 的提取也可以采用公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 CD 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 20μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 10min 否 2 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 3538 或无 Ct 值。 6. 质控标准 阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 7. 检测方法的局限性 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果； 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验。 CD34 弱阳性细胞一般不分析。 目前有很多米兰方案的改进版，分别从：运用不同的 CD34 抗体、不同的溶血技术、加入其他抗体来提高鉴别力、变换荧光标记、使用 CD45 抗体或其他核酸染料来更方便地鉴别白细胞等方面进行改进。运用这些技术后，报道的移植所需足够的并且能快速完成的 CD34+ 细胞数量有着巨大差异。经过仔细研究发现这些差异是由于在 CD34 细胞计数过程中运用了不同的标本处理、染色和分析方法造成的。因为在未动员的正常外周血中， CD34 阳性细胞通常小于全部有核细胞
录PCR实验(RT PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA)等。使用高灵敏度的适时荧光PCR技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。
可选择，并有对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白质分子量Marker，核抽提物等提供，为免疫学研究工作提供了极大的方便。Abcam:著名的抗体生产厂家，提供近4000种一级抗体，500种二级抗体，400余种蛋白质及多肽，以及各类ELISA检测试剂盒。四、荧光探针及交联技术Molecular Probes：美国一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，一直致力于开发用于生物医学研究的荧光标记试剂。它们拥有2500多种独家产品，包括离子指示剂，高灵敏度的核酸及蛋白
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