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- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
125
- 英文名：
Streptococcus pneumoniae Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Streptococcus pneumoniae Detection Kit
肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, SP）可定植与呼吸道粘膜，当呼吸系统防御功能及肺部正常清除功能受损时，可引起呼吸系统疾病。各个年龄段人群都可能受感染，2 岁以下的幼儿最容易罹患。临床对获得肺炎患者诊断的金标准是细菌培养鉴定，但耗时长，繁琐。荧光 PCR 技术为肺炎链球菌提供了快速而敏感的诊断方法，解决了传统方法的不足。 本试剂盒适用于检测患者痰、咽拭子等样本中的肺炎链球菌，用于肺炎链球菌感染的辅助诊断。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对肺炎链球菌特异性引物，结合一条特异性探针， 用荧光 PCR 技术对肺炎链球菌的 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染病料的病原学检测。
肺炎链球菌（SP）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 50T/盒 |
| SP 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| SP 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：采集病人痰液或咽拭子标本，咽拭子应使用专用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及 舌部；迅速将拭子放入标本采集管中，旋紧管盖并密封，以防干燥。
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 取痰或咽拭子拭子 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。 1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进 行操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表： 试剂 SP 反应液 酶液 用量（样本数为 N） 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 45cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。 5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 6. 检测方法的局限性 1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验%～96%，而微球免疫方法能减少人力和试剂消耗，并缩短检测时间。在定量检测方面，国外也有报道。Dias等建立微球免疫方法，用于定量检测抗人乳头瘤病毒6、11、16和18型中和抗原的抗体，并根据检测结果确定用于临床诊断判定的抗体阈值。Lal等建立微球免疫检测方法，用于同时定量检测抗9种血清型肺炎链球菌的IgG抗体，研究表明，微球免疫液相蛋白芯片方法可用于肺炎链球菌疫苗免疫效果的评估。此外，国外还有报道建立液相蛋白芯片方法用于检测艾滋病病毒抗体、疱疹病毒抗体、麻疹和腮腺炎抗体、弓形虫抗体、呼吸
液相芯片，也称为微球体悬浮芯片（suspension array，liquid chip），是基于xMAP（flexible Multi Analyte Profiling）技术的新型生物芯片技术平台，它是在不同荧光编码的微球上进行抗原 抗体、酶 底物、配体 受体的结合反应及核酸杂交反应，通过红、绿两束激光分别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应，是继基因芯片、蛋白芯片之后的新一代高通量分子检测技术平台。迄今为止十年
。其它用于检测微生物的PCR技术还有：RT-PCR、巢式PCR、多重PCR和随机引物PCR等。核酸扩增技术在临床微生物学检验中的应用见表6-4-2。 表6-4-2 核酸扩增技术在临床微生物学检验中的应用 微生物种类 核酸扩增技术 应 用 金黄色葡萄球菌 多重PCR 对mecA基因检测 凝固酶阴性葡萄球菌 多重PCR 对mecA基因检测 肺炎链球菌 PCR 自溶酶和青霉素结合酶的检测 化脓性链球菌 PCR M蛋白基因的菌株分型 淋病奈瑟菌 LCR 尿道分泌物标本
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