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- 文献和实验
- 技术资料
- 检测范围:
31.25-2000 pg/mL
- 检测方法:
Sandwich
- 灵敏度:
13.3 pg/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥2240.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥3200.0 |
小鼠自噬相关蛋白12(ATG12)酶联免疫吸附检测试剂盒适合聚焦代谢调控、内分泌与能量稳态研究的实验室,尤其适合组织样本相关定量验证,用于定量检测样本中 ATG12 水平变化,帮助开展分组比较、表达差异分析与机制验证。核心优势是采用 Sandwich ELISA 方案,单次实验约 3.5 小时、每孔样本量 100 μL,兼顾常规批量检测效率与结果对比需求。适用样本包括 组织匀浆、cell lysates及其他生物液体,检测范围 31.25-2000 pg/mL,灵敏度 13.3 pg/mL。
基础信息
| 英文名称 | Mouse ATG12(Autophagy Related Protein 12) ELISA Kit |
|---|---|
| 相关别称 | APG12; APG12L; HAPG12; Ubiquitin-like protein ATG12 |
| 货号 | ELK8142 |
| 品牌 | ELK Biotechnology 科鹿生物 |
| 规格 | 48T / 96T |
| 检测方法 | Sandwich |
| 适用样本 | 组织匀浆、cell lysates及其他生物液体 |
| 检测范围 | 31.25-2000 pg/mL |
| 灵敏度 | 13.3 pg/mL |
| 标准品 | 2000 pg/mL |
| Uniprot ID | Q9CQY1 |
| 研究领域 | 代谢通路 |
试剂盒组成
| 组分 | 48T | 96T | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| 酶标板(可拆)(Pre-coated Microplate) | 6 条 × 8 孔 | 12 条 × 8 孔 | 4°C/-20°C |
| 冻干标准品(Standard (lyophilized)) | 1 | 2 | 4°C/-20°C |
| 标准品&样品稀释液(Standard/Sample Diluent Buffer) | 10 mL | 20 mL | 4°C/-20°C |
| 浓缩生物素化抗体(100×)(Biotinylated Antibody (100×)) | 60 μL | 120 μL | 4°C/-20°C |
| 生物素化抗体稀释液(Biotinylated Antibody Diluent) | 6 mL | 12 mL | 4°C/-20°C |
| 浓缩HRP酶结合物(100×)(Streptavidin-HRP (100×)) | 60 μL | 120 μL | 4°C/-20°C |
| 酶结合物稀释液(HRP Diluent) | 6 mL | 12 mL | 4°C/-20°C |
| 浓缩洗涤液(25×)(Wash Buffer (25×)) | 10 mL | 20 mL | 4°C/-20°C |
| 显色底物溶液(TMB)(TMB Substrate Solution) | 6 mL | 10 mL | 4°C/-20°C(避光) |
| 反应终止液(Stop Reagent) | 3 mL | 6 mL | 4°C/-20°C |
| 封板覆膜(Plate Covers) | 1 | 2 | 常温 |
| 产品说明书(Instruction Manual) | 1份 | 1份 | 常温 |
保存条件
试剂盒拆封后可 4°C 保存 1 周,如果 1 周内未用完,请将剩余酶标板,冻干标准品,浓缩生物素化抗体,浓缩 HRP 酶结合物放置在-20°C 保存,其他试剂4°C 保存,并在6 个月内用完。
若试剂盒未拆封:4°C(短时间存放,6 个月内有效);-20°C(长时间存放,1 年内有效);避免反复冻融,过期后请勿使用。
如果试剂盒整盒保存在-20°C,请在实验前一天晚上将试剂盒放置在4°C。
操作流程
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|
检测原理
小鼠自噬相关蛋白12(ATG12)酶联免疫吸附检测试剂盒采用夹心法原理。将特异性抗小鼠 ATG12抗体包被于96孔微孔板中,向微孔中分别加入小鼠 ATG12标准品或样本,使标准品中的小鼠 ATG12蛋白或样本中的小鼠 ATG12蛋白与固相于微孔板上的抗小鼠 ATG12抗体结合,然后加入生物素化抗小鼠 ATG12抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记链亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠 ATG12蛋白呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线计算出样品浓度。
性能验证数据
标准曲线
| Concentration (pg/mL) | OD | Corrected OD |
|---|---|---|
| 2000.00 | 1.941 | 1.856 |
| 1000.00 | 1.577 | 1.492 |
| 500.00 | 1.174 | 1.089 |
| 250.00 | 0.828 | 0.743 |
| 125.00 | 0.567 | 0.482 |
| 62.50 | 0.319 | 0.234 |
| 31.25 | 0.175 | 0.090 |
| 0.00 | 0.085 | 0.000 |

精密度
板内精密度(测定内的精密度): CV% < 8%
三个已知浓度的样品分别在1个酶标板上测试20次,以评估分析板内精密度。
板间精密度(测定板间间精密度): CV% < 10%
三个已知浓度的样品分别在3个不同的酶标板上测试40次,以评估分析板间的精密度。
回收率
分别往不同样本中添加已知浓度的小鼠 ATG12, 做回收率实验,得出回收率范围和平均回收率
| 样本类型 | 回收率范围 | 平均回收率 |
|---|---|---|
| 血清(n=5) | 77-95% | 86% |
| EDTA 血浆(n=5) | 87-99% | 93% |
| Heparin 血浆(n=5) | 78-92% | 85% |
线性
将添加有小鼠 ATG12的样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围
| 样本类型 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
|---|---|---|---|---|
| 血清(n=5) | 81-94% | 93-107% | 93-102% | 91-105% |
| EDTA 血浆(n=5) | 86-93% | 93-101% | 86-97% | 90-101% |
| Heparin 血浆(n=5) | 91-99% | 83-89% | 88-104% | 97-103% |
常见问题
Q:这款 ATG12 ELISA 试剂盒更适合哪些研究场景?
A:小鼠自噬相关蛋白12(ATG12)酶联免疫吸附检测试剂盒聚焦代谢调控、内分泌与能量稳态研究的实验室,尤其适合组织样本相关定量验证,可用于样本中 ATG12 的定量比较、分组筛查和机制验证。结合其适用样本 组织匀浆、cell lysates及其他生物液体,适合常规科研检测和阶段性课题验证。
Q:48T 和 96T 规格应该怎么选,更适合哪种采购场景?
A:如果当前以预实验、小批量验证或样本量较少的项目为主,可优先选择 48T;如果需要进行多批次分组比较、重复孔较多或计划连续检测,48T / 96T 中的 96T 规格更适合提高通量并减少补货频率。
Q:如果暂时不确定样本浓度,这款试剂盒是否仍然适合使用?
A:可以先结合本产品 31.25-2000 pg/mL 的检测范围和 13.3 pg/mL 的灵敏度进行预判断。若样本可能高于上限,建议先做梯度稀释后上样;若目标属于低丰度表达,这款试剂盒也适合做前期筛查和分组定量。
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文献和实验性意味着到现在为止科学家们对此知之甚少,直到 20 世纪 90 年代早期研究者 YoshinoriOhsumi 进行了一系列实验,他利用面包酵母进行研究鉴别出于对自体吞噬作用非常重要的关键基因,随后他进行了大量研究阐明了酵母细胞中自体吞噬作用发生的分子机制,并且也在我们的机体细胞中发现了类似更为复杂的机制。新研究将焦点放在 ATG12 和 ATG5 这两种蛋白的结构和功能上。这些蛋白正确连接可形成一种称作自噬体(autophagosome)的细胞器。自噬体可像垃圾袋一样移除有毒物质,通过再循环向细胞
重磅综述:年发文量近 10000,自噬领域第 4 版研究指南发布
对一些自噬相关蛋白标记物的检测:比如 Atg9/ATG9A、ATG12–ATG5、ATG14 以及 BECN1/Vps30/Atg6 等蛋白标记物的检测; 第三、整理了目前自噬研究的模式生物;本指南整理了目前能够进行自噬研究的模式动物,包括秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇、水螅、小鼠、家蚕、酵母、拟南芥以及斑马鱼等模式生物,模式生物作为自噬研究材料不仅能使我们解答最基本的自噬问题,对人类一些和自噬相关的疾病治疗也有借鉴意义。 自噬领域能有今天的这般繁荣,离不开领域内科学家们勤勤恳恳的默默付出,那么,从事自噬研究
相关,正在埋头苦干的你是否也在研究自噬呢?是否仍在「迷宫」般的信号通路中迷失自我呢?下面,我们梳理了自噬中的关键蛋白,希望让你的研究思路更加清晰。一个完整的自噬包括自噬启动、自噬体形成、自噬溶酶体形成,降解及再利用。参与的主要蛋白复合物包括:ATG1/ULK 蛋白激酶复合物、PI3K 蛋白激酶复合物、ATG8 泛素样蛋白结合系统、ATG12 泛素样蛋白结合系统以及 ATG9 循环系统。开启自噬参与者:ATG1/ULK 复合物、PI3K 复合物、LC3 募集以及 p62 的结合Beclin 1 是 Ⅲ 类
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