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- 2025年11月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
140
- 英文名：
Porcine Circovirus type II Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Porcine Circovirus type II Detection Kit
猪圆环病是由猪圆环病毒（Porcine Circovirus）引起猪的一种传染性、先天性颤抖和断奶仔猪多系统功能障碍性疾病。该病毒具有 PCV1 和PCV2 两种血清型， PCV1 无致病性。PCV2 具有很强的免疫抑制作用，临床上常表现为多病原混合感染，PCV2 与断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）密切相关，还可引起猪皮炎与肾炎综合征、呼吸道综合征和 A2 型先天性震颤等疾病，给养猪业造成巨大经济损失。因此PCV2 感染早期诊断尤为重要。 本试剂盒适用于检测从肺、淋巴结组织、全血等标本中分离出的猪圆环病毒 2 型 DNA，用于猪圆环病毒 2 型的辅助诊断。
本试剂盒用一对猪圆环病毒 2 型特异性引物，对猪圆环病毒 2 型 DNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学检测。
禽流感病毒N8亚型(AIV-N8)核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 名 称 | 规 格 | |
| PCV-2 反应液 | 550μL×2 管 | |
| PCV-2 阳性质控品 | 50μL ×1 管 | |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 | |
储存条件及有效期：PCR 仪、电泳仪、紫外凝胶成像仪等
适用仪器：PCR 仪、电泳仪、紫外凝胶成像仪等
标本采集：病死或扑杀的猪，取肺、淋巴结等组织；待检活猪，用注射器取血 5mL
保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标 本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中； 全血样本：待血凝固后，取血清放于离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清 100 μL 于灭菌离心管中 1.2 DNA 提取 采用公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请 按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 PCV-2 反应液 用量（样本数为 N） 21μL
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于 PCR 仪反应槽内；
4.2 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 1 1 cycle 94℃ 2min 2 35 cycles 94℃ 30sec 58℃ 30sec 72℃ 60 sec 反应体系为 25μL；
5. 电泳检测 1) 2%琼脂糖凝胶配制：稀释 50×TAE 缓冲液至 1×TAE (取 20mL 50×TAE 缓冲液， 加 980mL 双蒸水至 1L)，称 4g 琼脂糖放于 500mL 锥形瓶中，1×TAE 缓冲液 200 mL，置入微波炉中加热熔解(避免加热沸腾溶液外溢)，再加入 10μL 染料充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后使用； 2) 电泳：在电泳槽中加入 1×TAE 缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。用移液器取 10μ L PCR 扩增产物于琼脂糖凝胶孔中。加样后，以 5V/cm 电压，电泳 20-30min（每次电泳时，每隔 10min 观察一次。当加样缓冲液中溴酚蓝电泳过半至凝胶下 2/5 处时，可停止电泳）。电泳后，紫外灯下观察结果。
6. 结果判定 阳性质控品出现 1154 bp 条带，阴性质控品不出现条带或只出现片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。被检样品出现 1154 bp 条带，判断为阳性，否则为阴性。
7. 产品性能指标 试剂灵敏性 10-3 以上，特异性 100%，批间批内差异≤3%。
注意事项
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全 通则》进行处理。
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文献和实验(beads)为基质，微球悬浮于液相体系，每种微球可根据不同研究目的标定上特定抗体或受体探针，可对同一样品中多个不同的分子同时进行检测。微球表面可进行一系列修饰以适合固定各种蛋白、多肽或核酸等生物分子。xMAP技术可应用于蛋白或核酸的功能及其相互作用研究，分别称之为液相蛋白芯片技术和液相基因芯片技术。液相蛋白芯片体系主要包括微球、蛋白探针分子、被检测物和报告分子四种成分。在液相系统中，为了区分不同的探针，每一种用于标记探针的微球都带有独特的色彩编码，其原理是在微球中掺入不同比例的红色分类荧光及发色剂
酸和天冬氨酸以外的任意一种氨基酸）N--糖基化序列的特异天冬酰胺残基上开始，当新合成的蛋白质进入内质网腔后就发生 N 端序列糖基化反应（图 25-1B )。接着，当糖蛋白从内质网经高尔基体到达其最终目的地时，Glc3Man9GlcNAC2 前体沿着分泌途径进行进一步加工处理。如果糖基侧链能被内质网和高尔基体中的糖苷酶和糖基转移酶加工的话，Glc3Man9GlcNAc2 前体就会被成功转化为 Man9GlcNAc2 和 Man5GlcNAC2 范围内的髙甘露糖型 N-聚糖（图 25-1A)， 以及复杂
-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序列分析。现已成功地克隆了猪尿酸氧化酶基因、糖尿病相关肽基因和哺乳动物与禽类的嗜肝病毒基因。用脱氧肌苷（deoxyinosine；DI）引物进行PCR，可以代替编码蛋白的多种兼并密码子中的
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