DiR碘化物

产品介绍
DiR碘化物是一类长链的亲脂性荧光染料，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构，DiR呈深红色荧光，在水中荧光强度很弱，与细胞膜结合或者与亲脂性生物分子结合时，其荧光强度显著增强。其具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命，应用于细胞，染料在细胞质膜内横向扩散，导致整个细胞在其浓度下均匀染色。DiR 自身荧光背景较低，红外荧光可以穿透细胞和组织，可以在活体成像中用来示踪。

产品基本参数
中文名称：BLT DiR碘化物，DiR'[DiIC18(7)]
分子量（g/mol）：~1013.4
形态：固体粉末
纯度：95+%
溶剂：DMSO/DMF/EtOH
激发波长：748 nm
发射波长：780 nm

使用方法
1. 染色液制备
1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。储存液分装储存在-20 ℃或-80 ℃，避免反复冻融。
2）工作液制备：根据染色体系用合适的缓冲液（如：无血清培养基，PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。最佳染色的工作液浓度与细胞系和实验体系有关，可多次尝试染色实验优化，且工作液现配现用。
2. 悬浮细胞染色
1）加入适当体积（300 μL）的染色工作液重悬细胞，染色细胞浓度可尝试1×106/mL。
2）孵育细胞：在室温或37 ℃环境避光孵育细胞，不同的细胞最佳培养时间不同。建议首次孵育细胞20 min，之后可优化孵育时间，以得到均一的标记结果。
3）清洗多余染料：孵育结束，以1000～1500 rpm离心细胞5 min，去除上清液，用缓冲液重复清洗操作三次，注意缓慢操作。
3. 贴壁细胞的染色
1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
3）在盖玻片的一角加入适当体积（300 μL）的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4）以相同悬浮细胞的孵育条件进行孵育，及孵育时间优化。
5）吸干染料工作液，用培养液或缓冲液清洗盖玻片3次以上。
注：本方案仅供参考，具体实验条件请研究人员依据自身项目进行优化。
4. 外泌体的染色
1）用PBS稀释存储液，配制浓度为 50-100 μM 的染料工作液，建议加入外泌体悬浮液体积的1/10体积的染料工作液（如1mL内含100 μL工作液）。
2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 37 °C避光孵育 30 min。
注：染色条件和外泌体浓度有关，可多次尝试染色浓度和时间实验优化。
3）向孵育后的外泌体-染料复合物中加入10 mL的1X PBS混匀，，按照外泌体提取方法（离心或其他）再次提取外泌体，以去除多余染料，重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。
5. 检测条件
对于使用BLT小动物活体成像系列，可选择Ex/Em：745/820 nm，进行检测。

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注意事项
1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；
2．最佳染色的工作液浓度与细胞系和实验体系有关，可多次尝试染色实验优化，且工作液现配现用；
3．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！