大肠杆菌K-12基因组DNA BNCC369970

十张图带你读懂大肠杆菌

大家对大肠杆菌应该很熟悉，它是分子生物学里最常见的工程菌。基因克隆、蛋白表达，这些就是在大肠杆菌中实现的，这和大肠杆菌的结构密切相关。 大肠杆菌 K12 大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，棒状，约 2.5 微米长。有鞭毛，它的基因组由 4 639 221 个碱基对组成，至少编码 4 000 个基因。 扫描电镜下的 E.coli K12 菌株最早是 1921 年从疟疾患者的粪便中分离得到，一直作为纯种保藏在实验室里，已有 75 年。大肠杆菌 K12 容易生长，并且关于它的代谢

E. coli K-12限制外源DNA

生物(16)，但是不包括重要的实验有机体果蝇(17)和 酿酒酵母(18)。此外，此类菌种还应在胞嘧啶甲基转移酶造就新物种(19)或者保护cDNA免受酶切消化(20)过程中使用。由于甲基化腺嘌呤在许多细菌和低等真核细胞中存在，因此，从这些有机体中克隆基因组DNA时也应考虑到Mrr介导限制。 以下情况无须考虑E. coli K-12的限制： 大肠杆菌克隆复制后，外源甲基化模式将会丢失(获得大肠杆菌的甲基化模式)，除非克隆载体本身具有甲基转移酶活性。一旦成功导入，克隆可在Mcr+ Mrr+ 大肠杆菌菌株

具有代表性的新一代DNA测序仪

测序技术工作流程图。 （a）高通量鸟枪Sanger测序法。首先基因组DNA被随机切割成小片段分子，接着众多小片段DNA被克隆入质粒载 体，随后转化到大肠杆菌中。最后培养大肠杆菌提取质粒，进行测序。每一个测序反应都在只有几微升的反应体系中 完成。测序后获得一系列长短不一的末端标记有荧光的片段，最后通过对每一个延伸反应产物末端荧光颜色进行识 别来读取DNA序列。（b）鸟枪循环芯片测序法。首先将基因组DNA随机分割成小片段DNA分子，然后在这些小片段 DNA分子的末端连接上普通的接头，最后用这些小片段DNA分子制成