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- 文献和实验
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见包装
- 保质期:
见包装
- 英文名:
Escherichia coli XL1-Blue(MLM3613)
- 库存:
现货
- 供应商:
广州市左克生物
- 规格:
冻干粉
产品简介:
品牌:BNCC
货号:BNCC361978
产品名称:XL1-Blue(含MLM3613质粒)大肠杆菌
规格:冻干粉
品牌介绍:
北纳生物是一家专注于细胞、微生物菌种领域,集研发、生产和销售为一体的生物高科技企业,设有细胞库、微生物菌种库,细胞培养、菌种培养、分子生物学实验等实验室,全方位满足您的需求。
说明:1、细胞&菌种等产品规格有多种时,默认发第一种规格,不同规格价格不同,具体找客服联系; 2、北纳细胞&菌种货期可参考:冻存细胞现货当天可发出。复苏细胞需要7-15个工作日;菌种一般默认发冻干粉;其他如菌液或者平板等形式需要7-15个工作日。
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文献和实验(细菌内同源重组AdEasy System)一、目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)步骤1、选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒,以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 (1)从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB
最小的菌落),接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基,37℃培养10-15hr。 8 碱裂法提取质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选,大质粒为可能阳性克隆,进一步酶切鉴定。以PacI单酶切,0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段(约30kb),及一条小片段(约3.0或4.5kb)(同时可进行其它酶切鉴定),则基本确定为阳性克隆。 9 取1-5µl 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞(BJ5183为recA+,质粒DNA易发生突变,DH5α或JM109,XL1-blue菌株
的电转化感受态细胞特别耐受电击处理,方便好用,在DNA材料极珍贵、量少时,或构建有代表性文库时,建议采用电转化感受态细胞。ElectroTen-Blue®细胞是目前商品化的电转化感受态细胞中效率最高的,达到>3 x 1010 转化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等细 胞也提供电转化形式感受态细胞。SURE® -克隆不稳定 DNA 大肠杆菌DNA修复系统会针对重复序列、二级结构(如Z-DNA)等真核DNA进行重排或删除
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