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RT,避光
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99
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联硕生物
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100ml
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文献和实验min离心10min(从这一步开始,所有操作均在冰上进行,速度尽量快而稳);(3) 倒净上清培养液,用1ml冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞,冰浴;(4) 0~4℃,4000r/min离心10min;(5) 弃去上清液,加入500µll冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞。0~4℃,4000r/min离心10min;(6) 弃去上清液,加入100µl冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞,冰上放置片刻后,即制成了感受态细胞悬液;(7) 制备好的感受
6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加重蒸水溶解后,定容到100ml。过滤后置棕色瓶中,4℃保存,一般可放置1个月。3. pH8.9分离胶缓冲液: Tris 36.3g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH8.9,定容至100ml, 4℃保存。4. pH6.7浓缩胶缓冲液: Tris 5.98
一单菌落于 2 mL LB 培养基中,37 ℃ 以 200 rpm 速度振荡培养 12~16 h;3. 取 1 mL 上述培养物接种于 100 mL LB 培养基中,37 ℃ 以 200 rpm 的速度震荡培养直至 A600 值为 0.5~0.6 (大约 3 h);4. 将菌液置冰浴 10 min,然后 2,500×g,4 ℃ 离心 20 min 收集菌液;5. 弃上清,倒置离心管 1 min 除净剩余液体,然后加入 10 mL 冰冷的 100 mM CaCl2 液悬浮细胞,冰浴 10 min
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