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文献和实验干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
还可以和某些抗体的 Fab 和 F(ab’)2 段结合。 Tn5转座酶 转座酶是一大类细菌来源的蛋白,通过结合转座子序列末端并催化其转移到基因组上随机位置,实现“剪切-粘贴”或“复制-粘贴”型的 DNA 插入的作用。其中 Tn5 转座子因其转座的随机性好、稳定性高、插入位点容易测序等特点,已经成为分子遗传学及基因诊断学研究的热门工具。 Tn5 转座子是一种细菌转座子,全长约 5.8 kbp ,由编码三个抗生素(新霉素、博莱霉素、链霉素)的核心序列和两条倒置的 IS50 序列组成
转基因生物的等位基因分型。(A)可用针对目标区域的特异性PCR引物来检测基因位点是野生型序列(深灰色)还是转基因序列(黄色)。(B)如该凝胶照片所示,PCR 产物可用于确定基因型。在这些实验中,使用了野生型 (+/+)和转基因 (+/–和–/–) 小鼠的基因组 DNA。 但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, PCR 扩增子测序就是研究单核苷酸变异(SNVs)和单核苷酸多态性(SNP)的方法之一。强烈推荐使用高保真 DNA 聚合酶,以防止在 PCR 过程中引入多余
最常见的问题,这些多糖能抑制限制酶、连接酶及DNA聚合酶等酶类的生物活性。因此要从富含多酚和多糖的植物组织中分离获得高质量的基因组 DNA也并非易事[11l。目前采用的方法有以下几种。2.1 十六烷基三乙基澳化按(CTAB)法CT AB 是 一种阳离子去污剂,它能与核酸形成复合物,这些复合物在低盐溶液中会因溶解度的降低而沉淀,而在高盐溶液中可解离,从而使DNA和多糖分开,再用乙醇沉淀DNA 而除去CTAB。在该法中使用的聚维酮 (PVP)与多酚结合形成复合物,从而可有效避免多酚类化合物介导的DNA
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