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文献和实验, and 20 mMTris-HCl, pH 7.5, sterile filtered. 5. Syringe (30–50 mL) with 0.2-μm pore size filter. 2.3.2. Step 2: IMAC 1. Sample: Pooled Wnt3A containing fractions from Section2.3.1 . 2. HiTrap? Chelating, 1-mL column (GE Healthcare, Piscataway
);流动相为甲醇-水-乙醚(70:30:9);检测波长238nm;流速1.0ml/min。 刘长宏等用HPLC法测定尼莫地平和尼莫地平片的含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,填料粒径5μm,4.6×250mm;甲醇-水(70:30 )(水用稀醋酸调pH4.5)为流动相;检测波长237nm。 胡彦等用HPLC法测定尼莫地平胶囊的含量。岛津LC-10AD型高效液相色谱仪。色谱柱为ODS(4.6mm×20cm);流动相为pH4.80的甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠混合溶液
,500- 1000μl/瓶) ,刮落细胞,转移到Ep管。注意:冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g,5 min,取上清。 7.电泳分离:上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平, 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解
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