变性鲑鱼精DNA，AB63839-1ml

如何做好 Southern 杂交？

液（8 cm × 8 cm 的膜加 5 mL 即可），将膜的背面贴紧杂交瓶壁，正面朝向杂交液。放入 42 ℃ 杂交炉中，使杂交体系升到 42 ℃。取经超声粉碎的鲑鱼精 DNA（已溶解在水或 TE 中）100 ℃ 加热变性 5 min，迅速加到杂交瓶中，使其浓度达到 100 μg/mL。继续杂交 4 hr。鲑鱼精 DNA 的作用是封闭 NC 膜上没有 DNA 转移的位点，降低杂交背景、提高杂交特异性。2．杂交倒出预杂交的杂交液，换入等量新的已升温至 42 ℃ 的杂交液，同样加入变性的鲑鱼精 DNA。将探针

毕氏酵母氯化锂转化法

； 注：不要将感受态酵母菌冰浴； 毕氏酵母的转化 1. 煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA；鲑鱼精DNA主要是防止目的基因的降解，协助目的基因的转化 2. 将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液； 3. 对于每一个转化，按以下顺序加入： 50% PEG3350                      240ul 1M LiCl                           36ul 2mg

固相膜核酸分子杂交方法

　　2．变性DNA在硝酸纤维素膜上的固定　硝酸纤维素滤膜（孔径0.45μm）先在蒸馏水中充分浸泡，再用6×SSC浸泡30min～2h，凉干。DNA样品转移或加至硝酸纤维素膜上后，先室温干燥4h，然后在80。C真空干燥2h。 　　3．预杂交　湿润的滤膜放入可加热封口的塑料袋中，按每平方厘米滤膜加0.2ml预热至60。C的预杂交液（6×SSC，0.5%,SDS,5×Denhardt液，100μg/ml鲑鱼精DNA）。鲑鱼精DNA需经过剪切和DNA酶消化处理，然后酒精沉淀纯化，调浓度