三色预染低分子量蛋白质Marker(3-40kDa)，AB6

垂直电泳槽的使用

除（图 14）。 除去上层胶，用考马斯亮蓝溶液染色下层分离胶15分钟。 •将凝胶置于脱色缓冲液过夜震荡进行脱色。 •通过Dolphin-Doc凝胶成像分析系统的紫外/白光转换板拍照。 结果 图1. 电泳后的凝胶。左边外侧孔装载预染色marker，右边两个外侧泳道装载Pro-marker。中间的孔装载1 mg/ml的牛血清白蛋白 (BSA)。浓缩胶部分已被除去。 备注 •在12％的分离胶中用恒定电压输出设置对样品进行分离, BSA（66.2 kDa）被精确地分离到相

Western Blot经验分享第一弹

不完全”，如何判断转膜是否合格呢？很多人最先想到的是“丽春红”，在这里我们对此持保留意见，不是说丽春红染色不对或者不好，而是我们完全可以通过预染marker条带的情况间接地判断转膜情况，何必让膜经历一次不必要的染色呢！下面来说说转膜条件： 1. 转膜条件：对于分子量10-15kDa的指标转膜时间不宜过长，100V、冰浴45min足矣；对于分子量指标150kDa以上的指标，100V、冰浴2h也足够了；其他介于15-150kDa之间的指标100V、冰浴1h完全可以保证效果。 2. 转膜操作：准备

Western Blot(免疫印迹法)步骤

隆抗体，脱脂奶粉用于单克隆抗体，这样可得到较高的信噪比。预染的蛋白质Marker，可用于监测转膜的效率。 样品制备 原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为 定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。 1.培养细胞或药物处理。 2.弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。 3.加入1X SDS样品缓冲液(6-well plate,100μl /w或 75 cm2 plate