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联硕生物
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50ml
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文献和实验于高等植物的筛管、新形成的细胞壁、花粉粒以及花粉管中,将其用苯胺蓝染色后,在紫外光激发下,可发出黄至黄绿色的荧光。因此,把授粉后经用苯胺染色的子房放到荧光显微镜下观察,可看到花粉在柱头上萌发、花粉管发育的状态,以及胼胝质在柱头表面的沉积状况等,进行判断花粉与柱头是否亲和。 实验目的是学习花期人工控制自交测定选择自交不亲和系和蕾期自交繁殖自交不亲和系的方法;掌握用荧光显微镜检测植物的自交不亲和性技术;通过本实验加深对自交不亲和系选育过程的理解。 一、试材及用具 1.试材:白菜、甘蓝
纸桥浸入缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/cm,电流强度1~2mA/cm的条件下,电泳约20分钟,关闭电源。(4) 染色与脱色 取下凝胶板,用甲苯胺蓝溶液染色,用水洗去多余的染色液至背景无色为止。四、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 1.仪器装置 通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极,铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流挡。 2.试剂 (1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g,四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L盐
的水平式电泳室即可,电源为稳压直流电源,常压电泳一般在100-500V,高压电泳一般在500-10000V。 2 试剂 (1) 醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节到pH值至3.0,在加水至1000ml。 (2) 甲苯胺蓝溶液 去甲苯胺蓝0.1g,加水100ml使溶解。 3 操作法 (1) 制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲溶液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜
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