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2-8℃
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99
- 供应商:
联硕生物
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500ml
纯度:1mg/mL
保存温度:2-8℃
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文献和实验加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
,直到全部溶解,用 HCl 调节 PH 值到 7.4; 2.加 10 ml 10% 的 NP-40; 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠,搅拌,直到溶液澄清; 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA,用量筒定容到 100 ml,2~8 ℃ 保存; 5.理论上,蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入(抑蛋白酶肽,亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl;PMSF,Na3VO4,NaF 各 500 μl),但是 PMSF 在水溶液中很不稳定,30 分钟就会降解一半,所以 PMSF 应该
2、器材(1)胰脏(2)组织捣碎机(3) 离心机(4)磁力搅拌器(5)透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅(6)烧杯、量筒、刻度吸管、 试管 、玻璃漏斗(7)布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等 [方法和步骤] 方法一1、 胰蛋白酶原的提取取新鲜胰脏约150g,剥去结缔组织和脂肪,取净重100g,切成碎块,在组织捣碎机中捣碎,并加入2倍体积预冷的pH2.5~3.0乙酸化水溶液,制成匀浆。浆液倒入500mL烧杯中,用10
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