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- 文献和实验
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RT
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99
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联硕生物
- 规格:
500ml
纯度:0.075mol/L KCl
保存温度:RT
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文献和实验试管 架,小 试管 10支,2ml吸管1支,吸球1个,2ml注射器一支,9号注射针头1个,1%NaCl溶液, 蒸馏 水,记号笔。 【实验步骤和项目】 1. 制备不同浓度的低渗盐溶液:取小试管10支,编号并排列月试管架上。按表8-1向各试管中分别加入不同量的NaCl溶液,再向各试管中加入不同量的 蒸馏 水,使其总体积为2ml。 表8-1 各种低渗 盐溶液 的配制
加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
细胞 2~3 次,换液后,按 1% 的比列加入细胞松弛素 B(如 4.95 mL RPMI- 10 + 0.05 mL cytoB)。具体试验方案见下表:4、收获细胞及制片用胰蛋白酶溶液消化细胞,加入 0.075mol/L 氯化钾溶液进行低渗处理,固定液(甲醇:冰醋酸 = 3:1,可适当调整冰醋酸浓度,但不宜过大)进行固定并滴片,用吉姆萨染液染色,中性树胶封片,并于油镜下进行阅片,每处理组计数 500 个细胞中的增值指数 CBPI 和细胞复制指数 RI,计算出细胞毒性;每一剂量组应分析不少于 2000
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