EDTA洗液，AB63898-500ml

小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项

加入适量红细胞裂解液裂解红细胞（可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞，室温裂解 2 min 后，立马加入 10 mL PBS，300 g 离心 5 min 后弃上清）。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养，请注意无菌操作。 收集腹水时，从小鼠左侧（肠道较多）注射 PBS，从右侧（器脏较大）抽腹腔灌洗液，注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱，加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存，但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞，巨噬细胞检测需要封闭Fc受体，此时可使用小鼠 CD16/32纯

Elabscience|肺泡巨噬细胞研究必看：LPS诱导急性肺炎模型制备与检测全攻略

s-1 min，确保液体充分进入下呼吸道，继续培养小鼠24 h。 2. 肺泡灌洗液的制备 （1）将正常小鼠和急性肺炎小鼠分别麻醉后，仰卧固定，充分暴露颈部和胸部区域，做好操作区域的消毒处理。 （2）用眼科剪在小鼠颈部正中做长约1 cm的切口，逐层分离皮肤、皮下组织和肌肉，暴露白色气管。 （3）将1 mL注射器连接气管插管（26G头皮针），针头平行插入气管内，插入深度控制在0.8-1 cm。 （4）缓慢推注PBS（2 mM EDTA+1% BSA），剂量为0.5-1 mL/次（可根据小鼠体重灵活调整

人单核细胞和中性粒细胞

M199 + 35g NaHCO3 + 25mM Hepes + 5 mM glutamine + 50 ug/ml Gentamycin.1M Hepes: 119.1 g Hepes + 500 ml dH2 O.Media A: 1X HBSS (10X:50ml) + 10 mM Hepes (1M: 5 ml) + 5 mM EDTA (0.5M: 5ml) + 2.5 % FBS (12.5 ml) in 500 ml.Media B: RPMI1640 470 ml + Gent