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鹿森生物
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文献和实验)或作适当稀释的标准参考品于反应孔中,同时作空白孔,阴性和阳性孔对照。37℃孵育1小时,洗涤。 3. 加B-Ab:已作适当稀释的生物素化抗体(B-Ab),加于每孔0.1ml,37℃孵育30~60分钟。洗涤。 4. 加A-HRP:已作适当稀释的辣根过氧化物酶标记的亲和素(A-HRP),于每孔加0.1ml,37℃孵育30~45分钟。洗涤4次。 5. 底物显色:于上述各反应孔中加入临时配制的TMB(或OPD)底物应用液0.1ml,于37℃10~30分钟。再加2M H2SO4
2. 加样:加入待检样品(未知抗原)或作适当稀释的标准参考品于反应孔中,同时作空白孔,阴性和阳性孔对照。37℃孵育1小时,洗涤。 3. 加B-Ab:已作适当稀释的生物素化抗体(B-Ab),加于每孔0.1ml,37℃孵育30~60分钟。洗涤。 4. 加A-HRP:已作适当稀释的辣根过氧化物酶标记的亲和素(A-HRP),于每孔加0.1ml,37℃孵育30~45分钟。洗涤4次。 5. 底物显色:于上述各反应孔中加入临时配制
胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3,需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl.测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头,因此,一般用精密的pH试纸测定其pH即可。几种常用的蛋白质标记时胶体金所用的pH值见表5-4.表5-4 常用几种蛋白质标记时胶体金所用的pH值如下 蛋白质pH抗体(γ球蛋白)9.0亲合层析的IgG7.6单克隆抗体8.2F(ab')27.2SPA(葡萄球菌蛋白)6.0蓖麻子植物凝血素Ⅰ8.0蓖麻子植物凝血素Ⅱ8.0花生凝集素6.3Helix pomatia lectin
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