Cas9 Nickase: EF1-hspCas9-nick

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA

CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计

来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。