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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
1H-Benzodazepin-2(3H)-one
- 库存:
999
- 供应商:
智溯科ZSK
- CAS号:
19301-09-8
- 规格:
10mg/100mg/6873mg
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达,分子量是14kd,5%的浓缩胶70v,12%,或15%的分离胶110v,跑90min。湿转:100v,90min。封闭用5%的脱脂奶粉,封闭3h(因为背景深,以为封闭久会好些)。一抗1:3000,4度过夜,二抗1:5000,孵育1h,洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深,虽然可以看见目的条带,但还是有一些非特异性的条带出现,不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
/L pH8.1 NaHCO3液中。 (2) 加入0.1ml用无水乙醇配制的1%的1-荧光-2,4二硝基苯,室温(20℃)温和搅拌1h。 (3) 加入1ml0.16mol/L 乙二醇,室温搅拌1h。 (4) 以0.01mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液充分透析。 (5) 加入经0.01mol/L pH 9.5碳酸盐缓冲液平衡的SPA 5mg/ml,于20℃温和搅拌2h~3h。 (6) 加入5mg KBH4,混匀后,4℃放置3h
yukituki 最近做Akt的WB遇到了问题: 我用的是CST的Akt抗体以及pAkt抗体,染小鼠组织(肝,肾,脾,肺,脑等)。 5%BSA(TBST稀释)4度封闭过夜 之后一抗是5%脱脂牛奶稀释,1:500,过夜,二抗1:2000稀释,2-3h 染出来的片子很脏,而且Akt勉强可以见到,但是pAkt没染出来条带 提组织用的是RIPA(每100mg用500ul),加了PMSF以及NaF,冰上
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