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- 文献和实验
- 技术资料
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见包装
- 保质期:
见包装
- 库存:
88
- 供应商:
广州市左克生物
- 规格:
200U
肠激酶(EC 3.4.21.9)是一种丝氨酸蛋白水解酶,能高效专一地识别蛋白质中Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(DDDDK)序列,并在赖氨酸(Lys,K)的C端水解肽键,产生切割,在生物体内水解胰蛋白酶原转变为胰蛋白酶,由于肠激酶具有高度专一性和高效酶切特性,广泛应用于基因工程产品的开发。 天然肠激酶由1条115kDa的重链和1条35kDa的轻链组成,重链起锚定细胞膜的作用,轻链具有全酶完整的催化活性。本产品为牛肠激酶的轻链活性核心区域与组氨酸标签的融合蛋白,采用大肠杆菌分泌技术表达,与天然肠激酶相比,比活性更高。同时带有组氨酸标签,酶切后可用镍柱(NRPB07)去除样品中的rbEK-His,特别适用于基因工程融合蛋白的酶切。
产品特点与技术指标
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产品名称 |
重组牛肠激酶(组氨酸标签)(Recombinant Bovine Enterokinase, His-tag; r-bEK-His) |
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目录编号 |
NRPA19 |
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规 格 |
200 U(液体),1000 U(液体),100 μg,1 mg |
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产品形式 |
液体为50mM Tris-HCl(pH8.0), 50%甘油;冻干粉冻干前为50mM Tris-HCl(pH8.0)溶液 |
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分 子 量 |
28.1 kDa(SDS-PAGE检测约为30 kDa) |
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等电点 |
5.85 |
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比 活 性 |
≥40000 U/mg,即1mg rbEK-His至少切割2000mg融合蛋白。 |
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吸光系数 |
紫外吸收法,消光系数E(0.1% at 280 nm) =1.92 |
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来 源 |
大肠杆菌 |
| 运输条件 | 冰袋或干冰低温运输 |
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保存条件 |
-20℃保存 |
| 有效期 | 3年 |
注:
(1)一些试剂会影响酶的活性,如 >2M Urea,>250mM NaCl,>20mM β-ME,>0.1% SDS,>50mM Imidazole。样品中如果含有这些成分,需要透析至50mM Tris-HCl (pH8.0)。
(2)磷酸盐会抑制肠激酶的活性,应避免使用磷酸盐缓冲液作为酶切体系。
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蛋白的损失。 如何进行柱上酶切 柱上酶切纯化路线比较简单,只需上样后加入蛋白酶,在合适的温度下进行孵育一段时间,经过清洗便可得到纯度较高的无标签的目标蛋白。 去除标签的关键在于选择高效的蛋白酶并构建相应的氨基酸识别序列。下表展示的是几种常见的内切酶及对应酶切位点。 组氨酸标签由于分子量小通常不需要去除。如有必要,可使用 TEV 蛋白酶去除组氨酸标签。由于TEV酶带有六组氨酸标签,因此可实现柱上酶切而得到高纯度无标签的目标蛋白。 PreScission
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