Sciencell 1001 ECM 内皮细胞培养基

产品名称	ECM内皮细胞培养基/ECM Endothelial Cell Medium
品牌	Sciencell
货号	1001
规格	500mL（基础培养基）
	25mL FBS（货号 #0025）
	5mL 内皮细胞生长补充剂（ECGS，货号 #1052）
	5mL 青霉素/链霉素溶液（P/S，货号 #0503）
存储	将基础培养基储存在4°C，将ECGS、FBS和P/S溶液储存在-20°C,避光。
航运	基础培养基：室温。补充剂：干冰。

 

一、产品概述

内皮细胞培养基（ECM）与内皮细胞生长补充剂（ECGS，Cat #1052）和25ml胎牛血清（FBS）一起使用时，是一种完整的培养基，设计用于体外正常内皮细胞的最佳生长。它是一种无菌液体培养基，含有必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和低浓度的胎牛血清（5%）。该培养基由HEPES和碳酸氢盐缓冲，在气氛为5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配制（定量和定性）可提供最佳平衡的营养环境，选择性地支持正常内皮细胞在体外的生长。

 

二、产品组成

ECM培养基为即用型完全培养基，主要组成成分包括：

1.基础培养基：采用特殊配方的基础培养液，为细胞提供基本的碳源、氮源、维生素、矿物质等营养物质。

2.胎牛血清（FBS）：添加经过严格筛选和质量控制的胎牛血清（终浓度通常为5-10%），提供细胞生长所需的天然生长因子、激素、脂质和黏附蛋白等。

3.内皮细胞生长添加物（ECGS）：包含特定的重组蛋白生长因子（如VEGF、EGF、bFGF等）、激素（如氢化可的松）以及其他促进内皮细胞增殖和维持其表型的关键成分。

4.抗生素：通常添加青霉素（Penicillin）和链霉素（Streptomycin）混合液，以预防细菌污染，保障细胞培养环境的无菌性。

 

三、产品特性与优势

1.高特异性：针对内皮细胞的代谢特点和生长需求量身定制，显著提高内皮细胞的贴壁率、增殖速度和传代能力，优于通用型培养基。

2.功能维持：有效维持内皮细胞的典型形态特征（如铺路石样外观）和生物学功能，如血管形成能力、吞噬功能及对血管活性物质的反应性。

3.质量保障：所有原材料均经过严格筛选和质量检测，生产过程遵循标准化操作流程，确保每批次产品质量稳定、性能一致。

4.使用便捷：即开即用的完全培养基形式，无需用户自行配制和添加复杂成分，简化实验操作步骤，节省时间并减少实验误差。

5.低批次差异：通过严格的质量控制体系，最大限度降低不同批次产品间的性能差异，保证实验结果的可重复性。

 

四、适用细胞类型

适用于多种来源的原代内皮细胞培养，包括但不限于：

· 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）

· 人微血管内皮细胞（HMEC）

· 人主动脉内皮细胞（HAEC）

· 小鼠/大鼠主动脉内皮细胞

· 其他组织来源的大血管或微血管内皮细胞

 

五、储存与运输条件

1.储存条件：收到产品后，应立即置于2-8°C避光保存，请勿冷冻。

2.保质期：在规定储存条件下，自生产日期起保质期通常为6个月，请在保质期内使用，逾期禁止使用。

3.运输条件：采用冰袋低温运输，确保运输过程中温度维持在2-8°C，收到后请及时检查包装及产品状态。

 

六、产品的使用说明

（1）使用前准备

1.复温：若培养基为冷冻储存，使用前需将其从-20℃冰箱取出，置于2-8℃冰箱中缓慢解冻，或在室温下自然解冻，避免使用微波炉等快速加热方式，以防破坏培养基成分。

2.混匀：解冻后的培养基需轻轻颠倒混匀，使其中的营养成分和添加物均匀分布，避免剧烈振荡产生气泡。

3.预热：在进行细胞培养操作前，将所需量的培养基置于37℃恒温培养箱中预热30分钟左右，使培养基温度达到细胞培养的适宜温度。

 

（2）操作步骤

1.细胞复苏（若适用）：

o 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的内皮细胞，迅速置于37℃水浴锅中摇晃解冻，直至冻存管内仅剩少量冰晶。

o 用75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后，在超净工作台内将细胞悬液转移至含有适量预热ECM培养基的离心管中，轻轻混匀。

o 以1000-1200 rpm的速度离心5-8分钟，弃去上清液。

o 向离心管中加入适量预热的ECM培养基，吹打重悬细胞，调整细胞密度后接种于培养瓶或培养板中，置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中培养。

2.细胞传代：

o 当培养瓶中的内皮细胞生长至汇合度达到80%-90%时，即可进行传代。

o 弃去培养瓶中的旧培养基，用无菌PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，以去除残留的培养基和血清。

o 加入适量的胰蛋白酶消化液，覆盖细胞表面，置于37℃培养箱中孵育2-5分钟，期间在显微镜下观察细胞形态变化，当细胞变圆、间隙增大时，立即加入适量预热的ECM培养基终止消化。

o 用移液管轻轻吹打培养瓶底部，使细胞完全脱落并形成单细胞悬液。

o 将细胞悬液转移至离心管中，以1000-1200 rpm的速度离心5-8分钟，弃去上清液。

o 加入适量预热的ECM培养基重悬细胞，根据需要按一定比例接种于新的培养瓶中，补充足量ECM培养基后，置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中继续培养。

3.细胞换液：

o 常规培养过程中，每隔1-2天更换一次ECM培养基。

o 弃去培养瓶中的旧培养基，用无菌PBS缓冲液轻轻洗涤细胞1-2次。

o 加入适量预热的新鲜ECM培养基，置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中继续培养。

 

（3）注意事项

1.操作全过程需严格遵守无菌操作技术，避免细菌、真菌等微生物污染。

2.培养基在使用前应检查是否有浑浊、沉淀、颜色异常等现象，若出现上述情况，禁止使用。

3.避免培养基长时间暴露于光线直射下，以防某些敏感成分分解失效。

4.不同批次的培养基可能存在轻微差异，建议在使用新批次培养基时进行小范围细胞培养测试，确认其适用性。

5.胰蛋白酶的消化时间需根据细胞状态和消化液浓度灵活调整，避免消化过度损伤细胞。

6.培养过程中应密切观察细胞生长状态，如发现细胞生长异常（如形态改变、贴壁不良、污染等），应及时处理。

7.避免反复冻融：培养基一经解冻，请勿再次冷冻，多次冻融会导致营养成分失活和沉淀产生。

8.颜色变化观察：培养基中酚红指示剂可反映pH变化，正常为橙红色；若变为黄色（偏酸性）或紫色（偏碱性），需及时检查培养箱CO₂浓度或是否存在污染。

9.血清沉淀处理：低温储存可能导致血清中部分蛋白成分析出，若出现轻微沉淀，可在37°C水浴中轻轻摇晃至沉淀溶解，不影响使用；若沉淀严重或培养基浑浊，请勿使用。

10.安全提示：本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗，操作时请佩戴适当的个人防护装备（如手套、实验服、护目镜）。

11.细胞系验证：建议定期对培养的内皮细胞进行身份验证（如特异性标志物CD31、vWF免疫荧光染色）和污染检测（如支原体检测）。

 

（4）常见问题及解决方法

1.细胞生长缓慢：

o 可能原因：培养基预热不充分、培养箱温度或CO₂浓度异常、细胞接种密度过低、细胞老化或污染等。

o 解决方法：确保培养基预热至37℃；检查培养箱参数并校准；适当提高细胞接种密度；更换新的细胞种子；若怀疑污染，及时进行无菌检测并处理。

2.细胞形态异常：

o 可能原因：培养基质量问题、消化过度、污染、培养环境不适等。

o 解决方法：更换新批次的ECM培养基；优化胰蛋白酶消化时间和操作；检查是否存在微生物污染并清除；确保培养箱内温度、湿度和CO₂浓度适宜。

3.培养基出现沉淀：

o 可能原因：储存温度不当（如反复冻融、温度过低）、培养基中某些成分溶解度变化等。

o 解决方法：若沉淀在37℃预热后可溶解，且培养基其他性质正常，可尝试继续使用；若沉淀无法溶解或培养基出现其他异常，则应丢弃该批次培养基。

 

七、质量控制标准

每批次产品均通过以下严格质量检测：

· 无菌性检测：细菌、真菌、支原体检测结果均为阴性。

· pH值检测：在37°C、5% CO₂条件下，pH值维持在7.2-7.4范围内。

· 渗透压检测：符合内皮细胞正常生长的渗透压范围。

· 细胞活力检测：使用标准内皮细胞进行培养，细胞贴壁率>90%，连续传代5次以上仍保持良好生长状态和形态。

· 内毒素检测：内毒素含量≤0.1 EU/ml。