Human Caspase 3/CASP3 ELISA KI

英文名称：Human Caspase 3/CASP3 ELISA KIT

中文名称：人胱天蛋白酶3

产品货号：JEH-384

厂 家: 安徽巧伊

贮藏温度：2～8°

有效期： 6个月

PRO CASPASE-3简介：

Caspase是一类蛋白酶，有半胱氨酸残基包含于其活性位点中，对靶蛋白天冬氨酸残基的肽键进行特异性切割，使靶蛋白被激活或失活，在细胞凋亡中起到重要作用。目前已发现这类蛋白酶有15种，根据功能可分为调亡始动子，调亡效应子和炎症介导因子。Caspase在未激活时以酶原形式存在。Caspase-3又被称为半胱氨酸蛋白32，是caspase家族的重要成员之一。Caspase-3酶原是一个277个氨基酸的32kDa的蛋白。caspase-3在细胞凋亡中起着不可替代的作用.

pro-caspase-3在活化过程中从Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切，形成两个片段，两种亚基再组成活性形式的caspase-3。pro-caspase-3本身并没有催化活性，在活化时首先由颗粒酶B(GrzB)或caspase-10在D175剪切下小片段后它才被部分活化，随后则可进行下一步的自我催化。在剪切原结构域时可能还有其它caspase如ICE的参与。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中PRO CASPASE-3的浓度。PRO CASPASE-3捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的PRO CASPASE-3会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人PRO CASPASE-3抗体后，抗人PRO CASPASE-3抗体与PRO CASPASE-3接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在PRO CASPASE-3将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，PRO CASPASE-3浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中PRO CASPASE-3浓度。

人PRO CASPASE-3参考标准曲线

注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为67pg/ml。

2.特异性：与人caspase-2，caspase-7，caspase-8，caspase-9没有交叉反应。

3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

1. Tewari, M. et al. (1995) Cell 81:801.
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