7-氨基庚酸—929-17-9

TNF的生物活性测定

水稀释。1.6 胰酶：消化贴壁L929细胞。1.7 半效稀释度TNF标准品：1000IU/ml。2. 实验用具超净工作台，细胞培养烘箱，酒精灯，显微镜，细胞计数器，微量移液器，细胞培养板，细胞稀释槽，酶标仪。3. 操作步骤3．1样板：弃L929细胞培养瓶中的培养液，加入800—900μl胰酶消化细胞，细胞收缩后，弃胰酶，加入4ml培养液A，吹打细胞，混匀，用细胞计数板在显微镜下计数，并计算所需细胞总数，培养液体积，将消化好未贴壁的细胞重新悬浮于完全培养液A，并调整细胞浓度为10×104/ml左右并将细胞接种于96

TNF成品生物活性的测定的操作流程

样的各孔加入100μl培养液B，消除边缘效应，放入烘箱37°C，5%CO2，培养过夜。 3.4 染色和脱色：L929细胞培养过夜后，镜检在半数死亡孔到达D或E时终止反应，吸取上清，轻轻吹打2—3次，除去死细胞，每孔加入染色液30μl，静置5分钟左右。 用流水轻轻冲掉染色液，每孔加入100μl脱色液脱色，轻轻摇动使脱色完全，然后于酶标仪570nm波长下比色，测O.D.值,并设对照. 4. 处理数据:在座标纸上以570nm O.D.值(双孔加样测两点值

(讨论)TNFa的生物学作用

更好的生物学活性和抗肿瘤效应。此外，还有用基因工程方法，将TNF-α分子氨基端7个氨基酸残基缺失，再将8Pro、9Ser和10Asp改为8Arg、9Lys和lOArg，或者再同时将157Leu改为157Phe，改构后的TNF—d比天比天然TNF体外杀伤L929细胞的活性增加1000倍左右，在体内肿瘤出血坏死效应也明显增加。TNF-α和b发挥生物学效应的天然形式是同源的三聚体。 (2)人和小鼠TNF-β基因分别定位于第6和第17号染色体。HuTNF-β分子由205个氨基酸残基组成，含34氨基酸残基